烟叶中叶绿素和类胡萝卜素的测定.docVIP

存在特点和测定意义 一 、叶绿素种类： 种类 颜色 丙酮溶液中长波吸收峰 比例 叶绿素a 蓝绿色 663nm 3 叶绿素b 黄绿色 645nm 1 二、类胡萝卜素种类： 　　类胡萝卜素包括：胡萝卜素和叶黄素，二者之比是2：1。（?-胡萝卜素的乙醚溶液在451处有吸收峰） 三、测定意义： 　1、高水分，叶绿素含量高，愈近成熟，叶绿素降低。 　2、低生物碱品系，叶绿素含量高，不易烤 　　高生物碱品系，叶绿素含量低，易烤 　3、叶绿素含量影响烟叶成熟落黄河烘烤特性 叶绿素和类胡萝卜素测定 一、叶绿素测定 　 1、原理：用有机溶剂将叶绿素提取出来，制成待测液，根据提取液对某一波长的光有选择吸收，吸光度符合朗莫-比尔定律，计算出待测液中叶绿素含量： 　　E＝lgI0/I＝KCL 　　如果比色皿厚度一定，则上式简化为： 　　E＝KC 　　K：吸光系数 　　C：浓度 　　如果待测液中含有2种以上有色物质，其吸光度也符合朗莫-比尔定律 　　溶液中含有2种有色物质时，有下式成立： 　　Eλ1=Ka1 Ca+Kb1 Cb ………（1） 　　Eλ2=Ka2 Ca+Kb2 Cb ………（2） 　　在叶绿素的待测液中含叶绿素a和b ，则有： 　　E663＝82.04Ca＋9.27Cb ………（1） E645＝16.75Ca＋45.6Cb ………（2） 　　E663＝82.04Ca＋9.27Cb ………（1） E645＝16.75Ca＋45.6Cb ………（2） 　　解联立方程式（1）和（2）得到： 　　Ca=0.0127 E663-0.00259 E645 　　Cb=0.0229 E645-0.00467 E663 　　Ca+b=0.00805E663+0.0203E645 2、测定步骤 　 ①待测液制备：0.5-2g样品于乳钵（研钵）内，加4倍体积的丙酮和约10mL 80%的丙酮，乳棒研磨。用吸管仔细吸取抽出液转移到50mL容量瓶内，重向乳钵内加入10mL 80%的丙酮，继续研磨，合并抽出液，如此反复，直至研磨看不出有色素浸出为止，最后用80%丙酮定容到50mL，充分混匀，放冷暗处，使瓶内溶液澄清。 　 ②测定： 　　吸取2mL待测液，用80% 丙酮稀释到20mL，测定其在645nm，663nm处的吸光值E645，E663。 　 3、计算： 　　把测定值代入下式计算得到叶绿素a 和b 的浓度，单位：g/L 　　Ca=0.0127 E663-0.00259 E645 　　Cb=0.0229 E645-0.00467 E663 　　Ca+b=0.00805E663+0.0203E645 　　根据叶绿素浓度和待测液体积，分取倍数，计算出叶绿素含量 　　待测液体积：50mL，取2mL稀释成20mL 后测定吸光值。则有： 二、类胡萝卜素测定： 　 1、原理：将叶绿素a和b 　　分离出去，剩下的类胡萝卜素溶于乙醚中，测定这个有色溶液在451nm处的吸光值，计算出类胡萝卜素的近似含量 　 2、测定： 　　提取：5g样用丙酮提取叶绿素a和b 以及类胡萝卜素，蒸净提取液中的丙酮，加入乙醚，和等量20% （W/V）KOH的甲醇溶液，提取液中的叶绿素被皂化，皂化液移入分液漏斗，以免层加食盐水防止乳化，同时用水充分洗涤，加无水硫酸钠脱水，定容乙醚层，测定其在451nm处的吸光值。 　 3、计算 　　C=E/KL 　　E:吸光值， 　　K：吸光度，K451=250 　　L：比色皿厚度/cm 　　C：胡萝卜素浓度: g/L