第五章+分子生物学研究法上.pptVIP

5.2.2 核酸凝胶电泳技术 目的：分离不同的DNA分子 电泳迁移率：电泳分子在电场作用下的迁移速度。 影响迁移率的因素： （1）与电场强度、电泳分子净电荷成正比； （2）与电泳分子的摩擦系数成反比 分子摩擦系数为分子大小、极性、介质粘度的函数。 DNA和RNA在电场中为多聚阴离子，电泳时向正极移动。速度在于分子大小和构型。 电泳介质：一般用琼脂糖和聚丙烯酰胺，浓度与所分离的DNA和RNA的大小有关。（表） 染色剂：溴乙锭 5.2.3 细菌转化与目标DNA分子的增殖 转化法：将外源DNA导入宿主细胞，以改变细胞遗传性状的过程。或者细菌捕获另一菌株的DNA而发生遗传性状的改变，称为转化；将病毒DNA或病毒重组DNA直接导入宿主细胞，称为转染，以与病毒的感染相区别。 目的：目的基因导入受体细胞，分子扩增 供体菌株/受体菌株 感受态细胞：能够高效吸收外界DNA的细胞，是一种生理状态，可以人工诱获。 感受态的诱导方法： CaCl2法：0℃ CaCl2低渗，加入外源DNA，42℃热刺激 用氯化钙法使大肠杆菌细胞处于感受态，从而将外源DNA导入细胞，至今仍然是应用最广泛的方法。氯化钙法的作用机制并不完全清楚，可能是在低温下Ca2+ 使质膜变脆，经瞬间加热产生裂隙，外源DNA得以进入细胞内。制备感受态细胞的方法已有了不少改进，主要是加入各种金属离子或用还原剂和二甲亚砜处理细胞膜。 电击法：采用脉