细菌的遗传分析2014打印.pptVIP

微生物作为遗传研究材料的优越性 作为遗传研究材料具有独特优势，了解微生物遗传研究有助于理解多年来分子生物学、分子遗传学理论发展。 世代周期短，繁殖世代所需时间短； 易于操作管理和进行化学分析(纯培养与代谢产物累积)； 便于研究基因的突变(表现与选择)； 便于研究基因的作用(突变型生长条件与基因作用)； 便于研究基因的重组(重组群体大、选择方法简便有效)； 遗传物质比较简单，可作为研究高等生物的简单模型； 在研究基因结构、功能与表达调控时更为简便。 同时：微生物的应用领域日益扩大、成就突出(微生物工程)；在遗传工程(包括动植物)中，作为重要研究材料、工具，也具有决定性作用。 二、细菌遗传的实验研究方法 (一) 细胞计数(培养物细胞浓度) (二) 建立纯系的方法 (三) 选择培养法鉴定突变型与重组型 (四) 突变型与重组型的批量筛选方法 (一) 细胞计数(培养物细胞浓度) 培养物中微生物计数方法是微生物学的基本实验技术，其基本思路是： 对原培养物进行连续稀释； 进行平板涂布（或混合倒平板）培养； 由于每个细胞形成一个菌落，计数菌落数； 根据稀释倍数计算原培养物中的细胞浓度。 (二) 建立纯系的方法——纯培养 (三) 选择培养法鉴定突变型与重组型 许多细菌的突变都与培养基营养成分及培养条件有关。 营养缺陷型的筛选、鉴定： 选择培养法是根据菌株在基本培养基和营养培养基上的生长表现将菌株分为原养型(也称为原生营养型)与营养缺陷型(在基本培养基上不能正常生长，只能在相应的营养培养基上生长)。 其它突变类型的筛选、鉴定： 对于其它的突变类型(如温度敏感型)，也可以通过培养条件的选择培养来筛选与鉴定。 (四) 突变型与重组型的批量筛选方法 选择培养法一次可鉴定、筛选一种突变型，但要检测分离含有多种突变型的混和菌株，仅采用选择培养法要进行多次试验才能够达到目的、效率太低。 为高效检测、分离混和群体中不同突变型，黎德伯格夫妇设计了影印培养法。 该方法原理与选择培养法一致，但是采用影印法将在完全培养基上单菌落同时接种到不同选择培养基上同时对所有菌落进行选择培养，鉴定效率大大提高。 细菌的基因组 nucleoid(+plasmid) 1 结构: P107 环状双链DNA，单倍性，以折叠或螺旋状态存在； 2 大小：长约250~35000?m(未螺旋)； 3 复制方式：着膜式复制。 分裂特点：均等分裂，无基因重组。 细菌的突变型 (一)合成代谢功能的突变型 anabolic functional mutants: 营养缺陷型，auxotroph, X- (二)分解代谢功能的突变型： catabolic functional mutants: lac-等 (三)抗性突变型 resistant mutants 1 抗药性突变型: 青霉素: penr, pens 链霉素: strr, strs 突变型的筛选 例如： 营养缺陷型的筛选: u.v ? 野生型细菌 ? 完全培养基： ?影印培养 基本培养基： ? 补充培养基 ： 氨基酸类 维生素类 ? 系列氨基酸 补充培养基：赖氨酸 脯氨酸 精氨酸…. 在细菌中遗传物质有三种转移的形式。 转化（transformation） 接合（conjugation） 转导（transduction） 其共同特点是： （1）单方向转移； （2）都产生部分二倍体； （3）外源基因只有整合到环状染色体上才能稳定地遗传。 (一) 细菌转化实验 (二) 转化过程 (三) 共转化与遗传图谱绘制 感受态与感受态因子： 感受态指细菌能够从周围环境中吸收DNA分子进行转化的生理状态。 感受态主要受一类蛋白质(感受态因子)影响，感受态因子可以在细菌间进行转移，从感受态细菌中传递到非感受态细菌中，可以使后者变为感受态。 一般认为感受态出现在细菌对数生长后期，并且某些处理过程可以诱导或加强感受态，以大肠杆菌为例，用Ca2+(如CaCl2)处理对数生长后期的大肠杆菌可以增强其感受能力。 按照细菌出现感受态的方式，可把转化分为三种类型 自然转化(naturally occuring transformation)：细菌自发地出现感受态，如肺炎链球菌，流感嗜血杆菌，枯草杆菌等。 人工诱导的感受态(artificially induced competence)：如Ca2+诱