第四章 比色分析和分光光度分析.ppt

《发酵工业分析》 比色法的发展 第一节 概 述 1 光度分析法的特点 2 物质对光的选择性吸收 3 光吸收的基本定律 4 常用仪器 5 显色反应及显色条件的选择 6 影响比色与分光光度分析的因素 1 光度分析法的特点 有色物质颜色的深浅和浓度有关，利用比较溶液颜色深浅来测定含量的分析方法称为比色分析法。 目视比色称为比色法；利用分光光度计测试，称为分光光度法。 光度分析法特点： (1) 具有较高的灵敏度。 一般物质可测到10-3~10-6 mol?L-1 (2) 有一定的准确度。 相对误差为2%~5% (3) 操作简便、快速，选择性好，仪器设备简单。 (4) 应用广泛。 2 物质对光的选择性吸收 在可见光区(400~760nm)不同波长的光具有不同的颜色。 溶液呈现一定的颜色是对光选择性吸收的结果。当一束白光通过一有色溶液时，某些波长的光被溶液吸收，另一些波长的光则透过，溶液的颜色由透过光决定。 透射光与吸收光又可组成白光，这两种光称为互补色光。 如CuSO4溶液呈蓝色就是吸收了白光中黄光。 如果将不同波长的光通过一固定浓度和厚度的有色溶液，测量每一波长下有色溶液对光的吸收程度（吸光度A），然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得一曲线，称吸收曲线。 图中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三条曲线，代表同一被测物质含量由高到低的吸收曲线。 （1）同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax （2）不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似，λmax不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和λmax则不同。 （3）在λmax处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。 3 光吸收的基本吸收定律 （1） 朗伯-比尔定律 （2） 吸光度的加和性 （3） 对朗伯-比尔定律的偏离 （1） 朗伯-比尔定律 当一束平行的单色光通过均匀、透明的有色溶液时，如溶液的浓度越大、液层厚度越大，则光强度的减弱越显著 。 吸光度测量中，也用透光度T表示 b：液层的厚度 cm； c：溶液的浓度 g·L-1 K：吸光系数 L · g-1 · cm-1 如“c”的单位：mol·L-1，此时的吸光系数称为摩尔吸光系数 k k 是吸光物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数。 在温度和波长等条件一定时， k 仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关。 k 是吸光物质吸光能力的量度， k 值越大， 光度法测定该物质的灵敏度越高。 由实验结果计算时，常以被测物质的总浓度代替吸光物质的浓度，这样计算的 k 值实际上是表观摩尔吸光系数。 例：已知含Fe2+浓度为1.0mg·L-1的溶液，用邻二氮菲光度法测定铁(Fe2+与邻二氮菲反应，生成橙红色配合物)。使用厚度为2 cm的吸收池，在波长510nm处测得 吸光度A= 0.390。计算该配合物的 摩尔吸光系数。。 解：已知铁的相对原子质量为 55.85。 （2） 吸光度的加和性 在含有多组分的体系中，若各组分对同一波长的光都有吸光作用，且各组分的吸光物质彼此不发生作用，则测得的吸光度等于各组分的吸光度之和。 A = A1+A2+…+A3 （3） 对朗伯-比尔定律的偏离 比尔定律的局限性 非单色入射光引起的偏离 由于溶液本身发生化学变化的原因引起的偏离 比尔定律的局限性 通常在用分光光度法进行分析时，多采用标准工作曲线法。即固定液层厚度、入射光的波长，测定一系列不同浓度标准溶液的吸光度，此时A与c应成直线关系。 比尔定律是一个有限制性的定律，它假设入射光为单色光，吸收粒子间没有干扰。因此仅在稀溶液中才适用。在高浓度时，由于吸光物质微粒间相互影响，从而改变了它对光的吸收能力，使吸光度与浓度的线性关系发生偏离。 非单色光引起的偏离 比尔定律假设入射光为单色光，但是目前仪器所能提供的入射光不是严格的单色光，是由波长范围较窄的光带组成的复合光。 A = k b c，k 在一定波长下是一常数，如入射光不为单色光，则k不为常数，A 与c 不成直线关系。 在最大吸收波长附近通常有一个吸收强度相差较小的区域，如入射光在此范围内，因k 变化较小，引起的偏离也较小，A与c基本上呈直线关系。 由于溶液本身发生化学变化 的原因引起的偏离 由于被测物质在溶液中发生缔合、离解或溶剂化、互变异构、配合物的逐级形成等化学因素，造成对比耳定律的偏离。 Cr2O72- + H2O 2CrO42- + 2H+ 4 比色法和分光光度法及其仪器 目视比色法与光电比色法 分光光度计的基本部