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细胞生物学实验心得 一、关于动植物细胞染色体标本的制备 （一）取材 有丝分裂：植物根尖、茎尖；动物骨髓细胞、羽髓细胞、培养的血细胞等 减数分裂：植物花粉、动物精巢等 （二）材料固定 目的： （1）迅速杀死细胞，防治细胞自溶、腐败； （2）使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形态。 （3）利于染色。 常用固定液：卡诺氏固定液，用于固定染色体标本的配方为CarnoyⅠ（甲醇：冰醋酸＝1：1） 使用方法：15－20倍于固定材料的固定液固定数小时至过夜 （三）材料保存 固定好的组织可长期保存于70％酒精中 （四）染色 组织压片染色体制备常用染液：醋酸洋红染液、改良苯酚（石碳酸）品红染液、龙胆紫染液 细胞悬液滴片常用染液：吉姆萨（Giemsa）染液 组织整染技巧：切碎染 染液配制注意 1、注意配方。龙胆紫用2％的醋酸配制和用水配制使用效果不同，前者较好 2、注意染液成熟。醋酸洋红染液、改良苯酚（石碳酸）品红染液、吉姆萨（Giemsa）染液配好后均需成熟一段时间，当时染色效果不好 染液使用注意 龙胆紫染染色体时染色时间要短（不超过1分钟），并且最好加水分色 吉姆萨染液只能用于干燥的滴片标本，染色时加液要多或扣染，染色结束冲洗时要带染液一起冲洗 （五）压片技巧 三步曲：切、敲、压 二、关于细胞膜选择通透性的实验 常做实验：植物细胞质壁分离实验、死活细胞染色鉴定实验 常用材料：紫皮洋葱、水绵 其它可用材料?带叶肉细胞的叶下表皮、0.03%中性红水溶液中泡过的洋葱内表皮 常用试剂：30％蔗糖、0.4％台盼蓝染液 涉及问题 1、选择性透性是活细胞的特性 2、造成质壁分离的机制？ 3、质壁分离实验可用葡萄糖或氯化钠做吗？ 4、与质壁分离程度有关的主要因素？不透膜的溶质分子数 三、关于细胞计数 （一）细胞计数板的结构 第一种：5大方格，中间大方格组成为16×25（16个中方格，每个中方格内25个小方格）＝400 第二种：5大方格，中间大方格组成为25×16（25个中方格，每个中方格内16个小方格） ＝400 （二）计数板上标识数目含义 1/400mm2：中间大方格共有400个小方格，每小格面积为1/400mm2 0.1mm：计数板底部到盖玻片的高度 （三）计数板使用方法 清洁－盖片－加样－计数 清洁：先用水，再用药棉蘸取75%酒精 加样：液滴接触盖玻片的边缘，使悬液通过毛细作用渗入计数室 计数范围 压线细胞计数原则 （四）细胞悬液密度计算 计两大格的计算方式： 细胞密度（个/ml）＝（2大格细胞总数/2）×104 ×稀释倍数 16格×25格的血球计数板计算公式： 细胞数／ml=4中格内细胞个数和/4×16×104×稀释倍数 25格x16格的血球计数板计算公式： 细胞数／ml=5中格内细胞个数和/5×25×104×稀释倍数 四、关于细胞涂片制备 材料：单细胞悬液 涂片易出现问题：太厚或太薄不便观察；动物细胞带水太多缓慢干燥引起失水 解决方法：用样减少；用固定液；用抗凝剂后离心 血涂片染色用的瑞氏（Wright）染液染色方法 先用蜡笔对选定的区域划线（用作堤防，阻止染液扩散）； 然后滴加适量染液覆盖选定区域，染1分钟（液面应浮现一层金黄色金属物质，表示染液起了染色作用）； 再滴加等量蒸馏水或pH6.4的磷酸盐缓冲液稀释染液，轻摇混匀，染色5min； 不要倒掉染液，流水或滴加蒸馏水直接洗去浮液 五、关于淀粉染色 染液：碘-碘化钾染液。配法：取碘化钾3克，溶于100毫升蒸馏水，加热使之溶解,然后加 入1克结晶碘溶解后，放于棕色瓶中保存。 使用：用于淀粉的鉴定时， 将其稀释3~5倍；观察淀粉粒上轮纹，需稀释100倍以上 * * 水绵（一种藻类） *