2恶英目前最热门的测试方法.docVIP

中国科学院二噁英分析中心 ---李工--136--0304-4558 二噁英类污染物检测? 目前二噁英类物质的检测方法有哪些？? 一、?化学仪器分析方法? HRGC/HRMS?GC/HRMS?HRGC/LRMS? 二、?生物检测方法? RROD细胞培养法?荧光素酶方法?EIA酶免疫方法?DELFIA荧光免疫法? HRGC/HRMS方法? 1、? 采用HRGC/HRMS（分辨率在1万以上的高分辨率色谱/质谱联用仪）的超痕量分析方法。?优点：? （1）?灵敏度高；? （2）?能同时监测多个离子。? （3）?是被多个发达国家认可的二噁英标准检测方法，如美国的EPA。?缺点：? （1）?分析操作复杂；? （2）?样品前处理过程非常复杂，分析样品所需时间周期长（通常为10-20d）；? （3）?设备投入成本和运行费用高昂；?（4）?购买同位素标准物质等消耗品费用高；? （5）?检测费用高昂。（一个样品需900-1800美元）； （6）?监测只能在专业实验室进行，而建造二噁英检测实验室需要几百万美元。? GC/HRMS和HRGC/LRMS? 使用GC/HRMS法可保证灵敏度，简化前处理步骤，缩短检测时间，降低检测成本，但仍需在专业实验室中完成；? 使用HRGC/LRMS法可极大降低在检测仪器方面的投入，但当每克样品中二恶英浓度低于pg/g水平时，却无法获得可靠的检测结果。因而HRGC/LRMS法仅适用于检测二恶英浓度较高的污染源样品和污染较重的土壤样品。例如，美国的EPA?8280方法可检测出土壤、底泥、飞灰和燃油等样品中含4～8个氯的二恶英化合物，不能用于检测如食品等二恶英含量较低的样品。?? 生物检测方法? 目前建立的生物学检测方法均是通过对Ah受体活化程度的测定来间接表达二恶英的TEQ。? EROD细胞培养法? 二噁英与Ah受体结合活化后，被Ah受体核转位因子（ARNT）转移到细胞核内，活化的核内基因是特异性DNA片段即二噁英相应因子（DRE）。启动发挥毒性的基因并增加其转录，从而激活EROD酶的活性。所以通过测定EROD酶的活性，可以了解二噁英激活Ah受体的能力，进而获得测试样品中二噁英的TEQ。? 荧光素酶方法? 该方法是将萤火虫荧光素酶作为报告基因结合到控制转录的DRE上，制备成质粒载体并转染H4llE大白鼠肝癌细胞系（含Ah受体转导途径的各个部件）。以此构成的CALUX荧光素酶诱导活性与二噁英的毒性系数相对应，最终测定的结果也是TEQ（毒性当量）? EIA酶免疫方法? 该方法是根据鼠克隆抗体DD3与二噁英结合的特点而建立的竞争仰制酶免疫方法。使用酶竞争配合物（HRP）和样品中二噁英共同竞争有限的DD3抗体的特异性结合位点，以一系列不同浓度的2,3,7,8-TCDD为标准物质，做出2,3,7,8-TCDD标样与对应样品的剂量—效应曲线，样品中二噁英毒性强度以计算出的TCDD毒性等价浓度间接表示。最终通过测定DD3与HRP螯合物的荧光强度来获取二噁英的TEQ。螯合物的荧光强度与二噁英的TEQ成反比。? DELFIA荧光免疫法? DELFIA（Dissociation-enhancement?Lanthanide?Fluoro?Immunoassay）法属于时间分辨荧光免疫分析法。该方法利用生物基因技术选择出合适的抗原键合铕离子与样品中二恶英竞争单克隆抗体，待免疫反应完全后加入荧光增强液,使铕离子从抗原中解离下来，进入增强液,形成胶束，高效地发出荧光。螯合物最终用时间分辨荧光法分析，其荧光强度与二恶英的TEQ成反比。?? 通过上图我们可以看出各种二噁英检测方法有优略性，我国现用的二噁英检测方法是HRGC/HRMS方法。图中我们可以看出这种检测方法精准度可以达到0.01pg/g（中国国家标准为0.5pg/g）属于最优越的检测方法。但是相对的这种方法的前处理期也是最长且最复杂的，投入的资金也相对很多。而且HRGC/HRMS方法必须在专业实验室中进行检测，所以前期必须要建设专业实验室，可谓相当耗费财力。? 而我们的荧光素酶法检测二噁英可谓相当方便、快捷也同样符合国家标准的0.5pg/g的精准度。? 多层二噁英分级检测体系? 第一级：低成本、快速的生物检测方法可应用于一般食品检测和环境监测，如定量筛选大规模的污染源样品等。? 第二级：一般的化学仪器分析包括GC/HRMS法和HRGC/LRMS法，可应用于对筛选出的样品进行较高精度的检测。?? 第三级：建立几个符合国际标准的二恶英专业检测实验室，完成对二恶英检测的权威认证分 有2,7-DCDD的土壤中加入Fe3+-H2O2（类似芬顿试剂），30min内DCDD几乎完全降解，降解的中间产物包括4-氯-邻苯二酚，与担子菌对DCDD的代谢途径较为类似。化学降解的优势在于见效快、经济实用，但在