02第二章 微生物发酵产酶.pptVIP

目前工业应用酶大多数来自微生物，这是因为以微生物为生产原料有许多优点： 一、产酶菌种的要求 工艺流程 第四节 酶发酵动力学 4、无机盐 不同无机盐在细胞的生命活动中作用不同，如主要组成元素（磷和硫），酶分子的组成元素（磷、硫、锌、钙），酶的激活剂（钾、镁、锌、铜、铁、锰、钙、钼、钴、碘等），调节pH、氧化还原电位和渗透压（钠、钾、钙、磷、氯等） 根据细胞对无机元素需要量的不同，无机元素分为大量元素和微量元素两大类。大量元素：磷、硫、钾、钙、镁、氯等；微量元素：铜、锰、锌、钼、钴、溴、碘等 5、 生长因子 微生物还需一些微量的像维生素一类的物质，才能正常生长发育，这类物质统称生长因子(或生长素)。其中包括某些氨基酸、维生素、嘌呤或嘧啶等。 酶制剂生产中所需的生长因子，大多是由天然原料提供，如玉米浆、麦芽汁、豆芽汁、酵母膏、麸皮、米糠等。玉米浆中一般含有生长素32~128mg/mL。 三、液体深层发酵的工艺控制 酶的发酵生产中发酵效果除了受到菌种产酶性能的影响外，还受到发酵温度、pH、溶氧量等条件的影响。 1、温度对产酶的影响 微生物生长繁殖和产酶的最适温度随着菌种和酶的性质不同而异，生长繁殖和产酶的最适温度往往不一致。 一般细菌为37 ℃，霉菌和放线菌为28～30 ℃，一些嗜热微生物需在40～50 ℃下生长繁殖，如红曲霉生长温度35～37℃，而生产糖化酶的最适温度为37～40 ℃。 在酶生产中，为了有利于菌体生长和酶的合成，也有进行变温生产的。例如以枯草杆菌ASl.398进行中性蛋白酶生产时，培养温度必须从31 ℃逐渐升温至40 ℃，然后再降温到31℃进行培养，蛋白酶产量比不升温者高66%。 发酵温度的变化主要随着微生物代谢反应、发酵中通风、搅拌速度的变化而变化的。 细胞的新陈代谢释放能量, 通风搅拌导致发酵液升温。同时由于热量的不断扩散，会导致培养基的温度不断降低。两者决定培养基的温度。 温度调控一般采用热水升温、冷水降温的方法。 发酵罐或其他生物反应器均设计有足够传热面积的热交换装置，如排管、蛇管、夹套、喷淋管等。 2、pH对产酶的影响 不同的细胞生长繁殖的最适pH有所不同。 细胞发酵产酶的最适pH与生长最适pH往往有所不同。细胞生产某种酶的最适pH通常接近于该酶催化反应的最适pH。 培养基的pH 随着细胞的生长、繁殖和新陈代谢产物的积累，往往会发生变化。 一般来说，培养基成分中碳/氮(C/N)比高，由于糖代谢产生有机酸，发酵液倾向于酸性，pH低；C/N低，发酵液倾向于碱性，pH高。 控制pH的方法：改变培养基的组分和比列；使用缓冲液维持一定的pH；使用酸碱调节pH等。 3、溶解氧对产酶的影响 细胞必须获得充足的氧气，使从培养基中获得的能源物质（一般是指各种碳源）经过有氧降解而生成大量的细胞的生长繁殖和酶的生物合成过程需要大量的能量ATP。 ◆在培养基中培养的细胞一般只能吸收和利用溶解氧。在发酵过程中必须不断供给氧（一般通过供给无菌空气来实现），使培养基中的溶解氧保持在一定的水平。 ◆细胞对溶解氧的需要量与细胞的呼吸强度及培养基中的细胞浓度密切相关。可以用耗氧速率KO2表示： KO2 = QO2 · Cc ◆氧的溶解速度又称为溶氧速率或溶氧系数，以Kd表示。 ◆溶氧速率与通气量、氧气分压、气液接触时间、气液接触面积以及培养液的性质等有密切关系。 ◆当溶氧速率和耗氧速率相等时，即：K02 =Kd 的条件下，培养液中的溶解氧的量保持恒定，可以满足细胞生长和发酵产酶的需要。 ◆调节溶解氧的方法主要有： ①调节通气量 ②调节氧的分压 ③调节气液接触时间 ④调节气液接触面积 ⑤改变培养液的性质 对于好气性微生物的深层发酵，除了需要通气外，还需要搅拌。搅拌有利于热交换、营养物质与菌体均匀接触，降低细胞周围的代谢产物，从而有利于新陈代谢。同时可打破空气气泡，从而提高溶氧量，增加空气利用。但搅拌速度主要因菌体大小而异，由于搅拌产生剪切力，易使细胞受损。同时搅拌也带来一定机械热，易使发酵液温度发生变化。搅拌速度还与发酵液黏度有关。 4、搅拌的影响 5、泡沫的影响