毛细管区带电泳分析五步蛇毒蛋白C激活剂和蛋白C的相互作用.PDF

２０１３年１月 Ｖｏｌ.３１ Ｎｏ.１ Ｊａｎｕａｒｙ ２０１３ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ５９~６３ 研究论文 ＤＯＩ:１０.３７２４/ＳＰ.Ｊ. １１２３.２０１２.０７０４１ 毛细管区带电泳分析五步蛇毒蛋白Ｃ激活剂和 蛋白Ｃ 的相互作用 １ꎬ２ ３ １ꎬ２∗ 孙　 瑶 ꎬ　 包鹏举 ꎬ　 张根葆 (１. 皖南医学院蛇毒研究所ꎬ安徽芜湖２４１００２ꎻ２. 皖南医学院病理生理学教研室ꎬ安徽芜湖２４１００２ꎻ ３. 皖南医学院生理学教研室ꎬ安徽芜湖２４１００２) 摘要:建立了毛细管区带电泳分析五步蛇毒蛋白Ｃ激活剂(ｐｒｏｔｅｉｎＣａｃｔｉｖａｔｏｒꎬＰＣＡ)与血浆蛋白Ｃ(ｐｒｏｔｅｉｎＣꎬ ＰＣ)的相互作用ꎮ 以未涂层毛细管(６０２ｃｍ(有效长度５０ ｃｍ)×７５μｍ)为分离柱ꎬ５０ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ￣ＨＣｌ(ｐＨ７４) 为运行缓冲液ꎬ于１９８ｎｍ波长下检测ꎮ 对影响五步蛇毒ＰＣＡ分离的因素(如缓冲液、离子浓度)及在３７５ ℃下孵 育不同时间的五步蛇毒ＰＣＡ与ＰＣ 的相互作用进行考察ꎮ 方法的检出限(以信噪比为３计)为３ ｍｇ/Ｌꎬ线性范围 为１０~３００ｍｇ/Ｌꎮ 五步蛇毒ＰＣＡ迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为０５６％ 和３８％ (ｎ＝６)ꎮ 等体积的五 步蛇毒ＰＣＡ(２００ｍｇ/Ｌ)与ＰＣ(６０ｍｇ/Ｌ)孵育５ ｍｉｎꎬ其结合率达到最大ꎬ且谱图中未见有ＰＣ水解的肽链ꎮ 该五 步蛇毒ＰＣＡ可改变ＰＣ空间构象直接激活ＰＣꎮ 该方法简单ꎬ灵敏度和分辨率高ꎬ分析结果为今后快速检测五步蛇 毒ＰＣＡ及其活性提供了重要的理论依据ꎮ 关键词:毛细管区带电泳ꎻ蛋白Ｃ激活剂ꎻ蛋白Ｃꎻ相互作用ꎻ五步蛇毒 中图分类号:Ｏ６５８　 　 　 文献标识码:Ａ　 　 　 文章编号:１０００￣８７１３(２０１３)０１￣００５９￣０５ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｃａｐｉｌｌａｒｙｚｏｎｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｉｎｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎＣｗｉｔｈｐｒｏｔｅｉｎＣａｃｔｉｖａｔｏｒｆｒｏｍ Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ ｖｅｎｏｍ １ꎬ２ ３ １ꎬ２∗ ＳＵＮＹａｏ ꎬＢＡＯＰｅｎｇｊｕ ꎬＺＨＡＮＧＧｅｎｂａｏ (１. ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｎａｋｅＶｅｎｏｍｏｆＷａｎｎａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅꎬＷｕｈｕ２４１００２ꎬＣｈｉｎａꎻ ２. ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙｏｆＷａｎｎａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅꎬＷｕｈｕ２４１００２ꎬＣｈｉｎａꎻ ３. ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙｏｆＷａｎｎａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅꎬＷｕｈｕ２４１００２ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ａｎｅｗｃａｐｉｌｌａｒｙｚｏｎｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｍｅｔｈｏｄ (ＣＺＥ) ｈａｓｂｅｅｎｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｏｒｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎＣ (ＰＣ) ｗｉｔｈａ ｐｒｏｔｅｉｎＣａｃｔｉｖａｔｏｒ (ＰＣＡ) ｆｒｏｍ Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ａｃｕｔｕｓ ｖｅｎｏｍ. Ｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａｎｕｎｃｏａｔｅｄｆｕｓｅｄ￣ｓｉｌ