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牛源致病性大肠杆菌O78型的分离与鉴定.pdf
奶牛
2017·2
保健 DAIRY HEALTH
牛源致病性大肠杆菌O78型的分离与鉴定
1 1 2
李天芝 ,于新友 ,沈志强
(1.山东绿都生物科技有限公司,滨州 256600;2.山东省滨州畜牧兽医研究院,滨州 256600)
中图分类号:S858.23 文献标识码:A 文章编号:1004-4264(2017)02-0026-04
DOI: 10.19305/ki.11-3009/s.2017.02.007
摘 要:本研究对山东省东营市某牛场病死牛的病料进行了病原菌的分离,并对分离菌株进行形态学观察、
生化试验、PCR鉴定、药敏试验和动物致病性试验。结果显示,本研究成功分离到一株O78型大肠杆菌,药
敏试验结果证实该菌株具有多重耐药性;致病性试验结果显示该菌株对昆明系小白鼠具有一定的致病性。
关键词:牛源;致病性大肠杆菌;分离;鉴定
20 16年3月份 ,山东省东营市某牛场新生犊牛出现 1.3 试剂及耗材
不 同程度 的食欲不振 、精神沉郁 、不愿站 立 、呼吸急 草酸铵结 晶紫 、革兰 氏碘液 、石炭酸复红染液 、
促 、全身衰弱、排灰 白色水样稀粪和肛 门周围、腹部及 血琼脂平板 、普通营养琼脂平板 、麦康凯营养琼脂培养
后肢有粪便黏附症状 ,有的病牛眼眶下陷 ,最后陷入脱 基和 肉汤液体培养基均 由本公 司质检部提供 ;DL2000
水状态 ,衰竭死亡。剖检发现肠 内有灰 白色稀粪 ,混有 Marker、TaqDNA聚合酶均购 自宝生物工程 (大连 )有
血丝和气泡 ,肠黏膜 出血 ,部分肠黏膜脱落 ,肠系膜淋 限公司 ;DNA 回收试剂盒和质粒小量提取试剂盒购 自生
巴结肿大 ,真 胃有凝乳块 ,胃黏膜水肿 、充血 ,肝脏有 工生物工程(上海)股份有限公司 ;药敏纸片 、糖发酵管
出血点 ,心 内膜 出血。笔者通过试验排除了球虫、隐孢 及生化试验用各种试剂购 自杭州天和微生物试剂有限公
子虫、牛轮状病毒和牛病毒性腹泻病毒感染的可能 ,从 司 ;大肠杆菌O型单价 阳性标准血清购 自中国兽 医药品
病死牛 的肝脏和肠 系膜淋 巴结病料 中分 离鉴定 出一株 监察所。
O78型牛大肠杆菌 ,并对其进行 了药敏试验和致病性试 1.4 试验设计
验 ,为该菌株 的后续工作奠定 了基础。 1.4.1 引物设计与合成
根 据 Ge n Ba nk 中大肠杆 菌 LEE毒 力 岛的eaeA 基
1 材料与方法
因序列(AJ223063) ,设计 1对 引物 ,上游 引物 :5 ′-
1.1 病料 ATAAACCGTGGTCTCAGCAAATCG -3 ′ ,下游 引
无 菌 采 取 病 死 牛 部 分 肝脏 、肠 系膜 淋 巴结 作 为
物 :5′- ATCACCATCAATACTCAACGGG -3′ ,扩
病料 。
增片段 1 043bp。引物 由生工生物工程(上海)股份有限
1.2 试验动物 公司合成。
20只 18~22g清洁级 昆
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