耐超高温α-淀粉酶的研制.pdfVIP

探 索 Ema1I_．．c¨nl【n。gd。e520@ ；2266ccoornrn _l●10llj_l_lI-】4：II_I_lIlIl_I_I衄U●i-_l●．l 耐超高温 一淀粉酶的研制 李谢晟日i5(高二学生，项 目研究者) 张四槐(项 目指导教师) 对射线处理后的地衣芽孢杆菌进行筛选 ，获得 (3)筛选培养基：在基础培养基上加入 2％琼脂 一 株能耐 l00℃高温的菌株。对菌株产生的酶进行 和0．01％曲利本蓝。 酶学性质研究表 明，该酶在 100℃下 ，酶活力是 (4)扩大培养基配方 ：胰蛋白胨 1．0一1．5％，酵母 27500u／mL，耐高温性和酶活力指标均超过 国家标 膏 0．5—0．7％，NaC10．9—1．1％，可溶性淀粉 1％，pH 准。进行产酶发酵中试和超滤 、盐析提取实验 ，结果 值6．5—7．0，其余为水 ，合计总重 5kg，0．1MPa灭菌 是超滤法 比盐析法 回收率高 12．5％，酶的比活力高 30—35min，冷却到40℃，制成扩大培养基，备用。 45．9％，成本低20％。酶制剂在酶活力 、热稳定性优于 (5)液态发酵培养基配方：(NH)2solo．22—0．27％， 国家优等品标准，具有实用价值。 KH2P040．30—0．37％，CaClO．015—0．02％，可溶性淀粉 下文介绍该项 目研制的过程。 0．25—0．30％，胰蛋白胨0．35—0．45％，玉米粉2．9—3．5％， 一 、 材料与方法 pH值 6．5—7．0，其余为水，合计总重 50kg，0．1MPa灭 (一)实验材料和药品 菌 30—35min，冷却到 40~C，制成液态发酵培养基 ，备 1．菌株 用 。 地衣芽孢杆菌(B．1icheniformis)，由湖南农大提供。 3．主要试剂 、材料 2．培养II 硅藻土 ，原碘液，稀碘液口I，磺化聚砜：超微滤膜 (1)琼脂平板培养基。培养基配方：胰蛋白胨1．5g， (型号 YM一200)，20g／L可溶性淀粉溶液 ，磷酸缓冲 酵母膏 0．7g，NaCI1．0g，琼脂 2．0g，可溶性淀粉 1．0g，pH 液，NaOH溶液 (0．5mol／L)，盐酸溶液 (0．Imo~L)。曲利 值 7．0，其余为水 ，合计总重 100g。上述 100g配料混 本蓝。 匀后分放于培养皿 ，0．1MPa灭菌30—35min，冷却到 4．主要仪器 室温，制成琼脂复壮培养基备用。 板框压滤机 ，Unie7200型可见分光光度计 ， (2)基础培养基。不加琼脂，其他与琼脂平板培 PL303型电子天平，HH一6型恒温水浴锅 ，电子万用 养基相同。 炉，PHS一3C型 pH计 ，离心机，XK96一B型快速混匀 2016年 9月 c ／59 探 索 器，高压消毒器，超净工作台，培养箱，恒温箱。 105oC、l10~C、115℃下，分别用 1％淀粉溶液作为底 (二 )实验方法 物进行酶催化反应，测量酶活力121。 1．菌株筛选、分离 4．一淀粉酶热稳定性的测定I1：取适量酶液 (添 取活化培养的地衣芽孢杆菌 ，加入装有45mL无 加或不添加Ca2+)分别在不同温度(70oc、80~C、90qC、 菌水的小三角瓶 中