实验九噬菌体效价的测定张理珉.pptVIP

三、实验原理 一个噬菌体→侵染宿主细胞→引起裂解→扩散重复侵染裂解→形成一个噬菌斑（琼脂凝胶中） 宿主细胞数远远大于噬菌体数？ 噬菌体效价（pfu/ml）= 噬菌斑数×10×稀释倍数 四、实验步骤 1、制备底层平板 将已灭菌融化的牛肉膏蛋白胨固体培养基平板6个（倒薄一些），凝固。 2、加入大肠杆菌敏感菌 在每个牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上，无菌条件下，各皿加入敏感菌菌悬液0.9mL。 3、稀释噬菌体 取1mL含噬菌体液加入到 9mL牛肉膏蛋白胨培养液中，采用10倍稀释法，分别制备噬菌体稀释液（10-7、 10-8 、 10-9 ）。 4、噬菌体与大肠杆菌敏感菌混合 将已加有大肠杆菌敏感菌6皿平板（ 10-7 、 10-8 、 10-9各2皿）中，分别加入0.1mL噬菌体稀释液，混合后放置5分钟。 5、加入上层培养基 将5mL溶化的半固体培养基中迅速倒入含噬菌体与大肠杆菌敏感菌平板中（45~50℃），并混合均匀。静止凝固。 6、培养 37℃培养5小时或室温培养12小时。 7、观察、计数 观察平板中的噬菌斑，将每一稀释度的噬菌斑形成单位（pfu）记录于表格内。 8、计算噬菌体的效价 按照六个计数原则选择，计算每毫升未稀释的原液的噬菌体效价