基于成份和遗传多样性的明党参动态.pptVIP

二、AFLP分析不同产地，不同个体遗传背景差异 1. 明党参基因组DNA提取 根据Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.3.0（Takara公司产品）方法提取明党参总DNA，用TE溶解DNA，待用。 ?2. DNA浓度与质量测定 用eppendorf的Biophotometer6131测定样品DNA浓度(OD值)。以1.0 %琼脂糖凝胶检测DNA主带质量：5μLDNA样品+ 1μL10 ×上样缓冲液，于5 V/ cm 电压下电泳80 min，EB染色，紫外灯下观察、拍照。 在PCR扩增反应中，Mg2+终浓度不仅影响TaqDNA聚合酶的活性，还能与dNTP、模板及引物结合，从而影响模板的解链温度、引物与模板的结合效率以及产物的特异性。dNTP是AFLP反应的原料，dNTP浓度过高，导致扩增反应中模板与引物的错配，使扩增出现非特异性，浓度过低又会影响扩增效率。因此，对于dNTP的最适用量也是需要经过对比分析才能确定的。所以本研究重点对Mg2+终浓度、dNTP浓度、模板用量进行了梯度对照，筛选到了最佳用量配比。扩增产物必须与完善的凝胶检测手段结合，才会产生理想的AFLP指纹，选用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染检测的方法具较强实用性，是一般实验室可以考虑的方案。 本文通过对AFLP分析过程选择性扩增反应体系的优化，确定了适宜明党参PCR扩增以及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染检测分析的最佳反应条件，获得了理想的指纹图谱，为研究明党参遗传多样性及其种质资源保护等提供了良好的技术保障。 。 存在的问题、纵深研究的建议及其他需要说明的情况 建议以部分常用大宗药用植物为模式加强药用植物化学成分尤其是有效成分积累与遗传背景以及环境因子之间的关系研究，探索药用植物有效成分积累的规律，为药用植物的有效利用提供一定的理论基础。 论文、出版专著目录 1. 基于TCMGIS的明党参产地适宜性研究，安徽农业科学，已接受（接收函见附件） 2. Identification of Differentially Expressed Genes Involved in the Early Bolting of Angelica sinensis (Oliv.) Diels, Genetics and Molecular Research, accepted（接受证明见附件） 验收评价意 2011年12月15日，南京中医药大学组织专家对江苏省高校自然科学研究计划项目/江苏省中医药局科技计划项目“项目名称”（项目编号：09KJB360005）进行了验收。验收委员会阅读了项目研究报告，查阅了相关资料，经认真讨论，形成验收意见如下： 1、项目组提交的验收资料齐全、数据翔实，符合验收要求。 2、该项目主要研究内容（1）高效液相色谱技术（HPLC）分析了不同产地、不同个体明党参化学成分合成之间的差异，探索了遗传背景变异和化学成分合成之间的关联。（2）扩增片段长度多爱性的方法（AFLP）研究了不同产地、不同个体明党参遗传背景之间的差异。 （3）考虑到明党参分布位置复杂，影响明党参化学成分积累的因素很多，扩大取样多研究结果的准确性和示范性具有更好的帮助，所以课题额外应用“中药材产地适宜性分析地理信息系统”(TCMGIS)对明党参Changium smymioides Wolff.在全国的生态适宜区进行分析和预测，为以后研究的样品选择提供一定基础。 3、该项目在国内外学术核心刊物投稿相关论文总计3篇，接受2篇，其中SCI收录1篇。 4、项目经费专款专用，使用合理规范。 验收委员会认为该项目研究达到预定研究目标，完成了合同规定的各项任务和指标，一致同意该项目通过验收。 基于成份和遗传多样性的明党参动态质量评价体系的构建 研究计划执行情况概述 项目基本按照原计划执行，内容略有增加： 1.高效液相色谱技术（HPLC）分析了不同产地、不同个体明党参化学成分合成之间的差异，探索了遗传背景变异和化学成分合成之间的关联。 2.扩增片段长度多爱性的方法（AFLP）研究了不同产地、不同个体明党参遗传背景之间的差异。 3.考虑到明党参分布位置复杂，影响明党参化学成分积累的因素很多，扩大取样多研究结果的准确性和示范性具有更好的帮助，所以课题额外应用“中药材产地适宜性分析地理信息系统”(TCMGIS)对明党参Changium smymioides Wolff.在全国的生态适宜区进行分析和预测，为以后研究的样品选择提供一定基础。 研究工作主要进展和所取得的成果 一、HPLC分析不同产地，不同个体化学成分的含量差异 二、AFLP分析不同产地，不同个体遗传背景差异 一、HPLC分析不同产地，不同个体化学成分的