分子生物学演习题.doc

第一章 练习题 1 一种DNA分子经三种限制酶完全酶切后得如下结果： EcoRI 5kb EcoRI/HindIII 1、2、3、4kb HindIII 3kb 、7kb EcoRI/PstI 2、3、5kb PstI 10kb HindIII/PstI 1、3、6kb 将各限制酶位点绘制在DNA分子上。 另一DNA分子经相同处理后得如下结果，将各限制酶位点标在DNA分子上。 EcoRI 1、3、6kb EcoRI/HindIII 1、3kb HindIII 4、6kb EcoRI/PstI 1、3、5kb PstI 2、8kb HindIII/PstI 2、6kb 3 下图中的一段DNA分子上有两个限制酶PstI和EcoRI识别位点，两位点相距10bp，现有一研究生要分析EcoRI右侧500bp区域内的功能，他需要在这一区域内获得各种缺失突变体以确定某功能区，他应如何设计此实验？假定EcoRI—PstI间的10bp除去后并不影响任何结果分析，但PstI位点左侧的DNA不能除去。 10bp 500bp PstI EcoRI 4 假如PstI位点为另一限制酶HindIII，实验又该如何设计？ 5现有一研究者打算将一EcoRI DNA片段克隆到另一个DNA分子的BamHI位点以便DNA扩增，但扩增后的DNA分子又可用BamHI限制酶将插入的片段回收，如何设计此实验。 6 一研究生要将一质粒（pI）上的BamHI-HindIII片段取代另一质粒（pII）上的BamHI-XbaI片段，所获重组质粒（pIII）上的插入片段要求能用BamHI-HindIII进行回收，问如何设计此实验？ H Xb H 5kb Pi 1kb 6kb .5kb 6kb 1kb B B B 7 现有一重组质粒的限制酶谱和克隆到的基因转录方向入图所示： HindIII PstI BamHI PstI BamHI BamHI HindIII 已知HindIII克隆片段中的BamHI（3kb）片段含有一完整的基因编码区，现要将此3kb的BamHI片段克隆到另一表达载体pB的BamHI位点，如何才能使插入片段与表达载体中的基因处于相同的阅读框架？如何证明插入基因的转录方向是相同的？ 8 为了检测绿豆核酸酶对5’-端突起的单链DNA切割是否准确有效，即该酶只除去单链而不损伤双链区。有一研究者设计了一套非常精巧的实验，其中一个实验是将一XbaI片段插入pBR322的Apr基因内的ScaI位点使该基因失活，然后再经一系列实验证明绿豆核酸酶的作用确实与预期的结果一致，你能否设计出这一套实验？(pBR322除含有Apr基因外，还含有Tcr基因) ScaI + Tc（当有外源DNA插入， XbaI片段 该基因失活） pBR322