血清学反应试验.ppt

血清学试验 血清学试验 抗原（antigen） 抗原的性质 抗原决定族 抗原种类 微生物抗原 细菌抗原 微生物抗原 抗体 抗体种类 IgM 等结构 抗体作用 抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC） 抗原抗体反应 抗原抗体反应条件 抗原抗体反应一般规律 抗原抗体反应一般规律 抗原抗体反应一般规律 血清凝集试验 间接凝集反应 间接血凝试验 间接血凝抑制试验 乳胶凝集试验 协同凝集试验 碳粉凝集试验 单向免疫扩散 双向琼脂扩散 双响琼脂扩散 抗体效价滴定 对流免疫电泳 对流免疫电泳原理 对流免疫电泳结果判定 对流电泳方法评价 火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis, RIE) 火箭免疫电泳 火箭免疫操作步骤 火箭免疫结果 火箭免疫电泳方法评价 免疫电泳(immunoelectrophoresis, IEP) 免疫电泳示意图 免疫电泳操作步骤 免疫电泳方法评价 补体结合反应 补体结合反应 免疫荧光技术 免疫荧光法 荧光标记法 酶标记抗体技术（免疫酶技术） 酶标记抗体技术（免疫酶技术） 酶联免疫吸附试验（简称ELISA） 直接法 间接法 斑点酶联免疫吸附试验 免疫转印技术(immuno-blot) 免疫转印技术操作步骤 免疫转印技术方法评价 中和试验　　 中和试验 直接法 用酶标记抗体直接处理含待检抗原的标本，洗涤后浸于含有过氧化氢和DAB的显色反应液中作用，然后在普通光学显微镜下观察颜色反应，抗原所在部位呈棕黄色。 间接法 含待检抗原的标本先用未标记的抗血清处理，洗涤后再用相应的酶标记抗抗体处理，洗涤，然后浸于含有过氧化氢和DAB的显色反应液中作用，普通光学显微镜下观察颜色反应，以指示是否有抗原-抗体-抗抗体复合物存在 。 将抗原或抗体吸附于固相载体的表面，酶标记物与相应的抗体或抗原反应后，形成酶标记抗原抗体复合物，在遇到相应底物时，结合物上的酶催化底物产生水解、氧化或还原等反应，从而生成可溶性或不溶性的有色物质，可用肉眼或酶标测定仪判定结果。颜色的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，因此，可根据颜色的深浅来定量抗体或抗原。 将已知抗原吸附在固相载体表面，洗除未吸附的抗原，加入一定量的酶标记抗体与样品(含有抗原)提取液的混合液，竞争温育后，在固相载体表面形成抗原-抗体-酶复合物。洗除多余部分，加入酶的底物。在酶的催化作用下，底物发生降解应，产生有色物质。通过酶标检测仪，测出酶底物的降解量，从而推知被测样品中的抗原量。? 将已知抗原吸附在固相载体表面，洗除未吸附抗原，加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液，竞争温育后，在固相载体表面形成抗原-抗体复合物。洗除多余抗体成分，然后加入酶标记的抗抗体，与吸附在固体表面的抗原-抗体复合物相结合，再加入酶的底物。在酶的催化作用下底物发生降解反应，产生有色产物，通过酶标检测仪测出酶底物的降解量，从而推知被测样品中的抗原量。 以纤维素薄膜为固相载体，在膜上进行免疫酶反应。先将抗原或抗体吸附在纤维素膜的表面，通过相应的抗体或抗原和酶标记物的一系列反应，形成酶标记抗原抗体复合物，加入底物后，结合物上的酶催化底物使其水解、氧化成另一种带色物质，沉着于抗原抗体复合物吸附部位，呈现出肉眼可见的颜色斑点，试验结果可通过颜色斑点的出现与否和色泽深浅进行判定。 1979年Towbin将核酸转印技术（Southern blot）应用于蛋白质研究，建立了蛋白质转印技术（Western blot）。 免疫转印技术的基本原理是将凝胶电泳与固相免疫测定结合起来，将经电泳分区的蛋白质精确且近似定量地转移到固相载体上如硝酸纤维素膜(NC膜)，并保持其原有的生物活性，再经荧光免疫、酶免疫、放射免疫技术等进行测定，可得以定位、定性和定量结果。实质上分3步骤即蛋白质组分分离、各组分转印及免疫检测。 协同凝集试验 　　葡萄球菌A蛋白是大多数金黄色葡萄球菌的特异性表面抗原，能与多种哺乳动物血清中的IgG分子的Fc片段相结合，结合后的IgG仍保持其抗体活性。当这种覆盖着特异性抗体的葡萄球菌与相应抗原结合时，可以相互连接引起协同凝集反应，在玻板上数分钟内即可判定结果(加图图八)。目前已广泛应用于快速鉴定细菌、霉形体和病毒等 抗原抗体反应类型-----间接凝集反应 炭粉凝集试验 　　以极细的活性炭粉作为载体的间接凝集试验，称为炭粉凝集试验。反应在玻板上或塑料反应盘进行，数分钟后即可判定结果。通常是用抗体致敏炭粉颗粒制成炭素血清，用以检测抗原，如马流产沙门氏菌；也可用抗原致敏炭粉，用以检测抗体，如腺病毒感染、沙门氏菌病、大肠杆菌病、囊虫病等的诊断。 抗原抗体反应类型-----间接凝集反应 抗原抗体反应类型-