人教版2017年高中生物第1部分专题5课题3血红蛋白的提取和分离(选修一)课件.pptVIP

蛋白质在凝胶色谱柱中行进的速度和途径主要与蛋白质分子的大小相关；在电场中的运动速度和方向除了与蛋白质的分子大小相关外，蛋白质的带电性质、电量、形状都影响其在电场中的运动方向和运动速度。 [例2] 凝胶色谱技术是一种快速而又简单的分离技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果，目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛应用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。据图回答问题： (1)a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中 洗脱出来的是__________，原因是__________。 (2)自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部 d位置相当于多孔板的结构可由________________________替代。 (3)装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存 在，原因是_________________________________。 (4)洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体________(填“相同”或“不同”)，洗脱时，对洗脱液的流速要求是________________________。 (5)若选用SephadexG-75，则“G”表示________，75表示________。 [解析]　本题主要考查凝胶色谱法的原理和操作注意事项，可按以下思路进行分析作答。 (1)原理：由于不同蛋白质其相对分子质量不同，相对分子质量较大的蛋白质不能进入凝胶内部通道，只能在凝胶外部移动，路程短，速度快，易洗脱；相对分子质量较小的则进入凝胶内部通道，路程长，速度慢。 (2)注意事项： ①凝胶色谱柱的制作：底部橡皮塞的凹穴上覆盖尼龙网和100目的尼龙纱，相当于多孔板。 ②凝胶色谱柱的装填：装填时尽量紧密，不得有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 ③装填材料即交联葡聚糖凝胶的特点及表示方法。 ④样品的加入和洗脱：洗脱时和浸泡凝胶所用液体均是物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液，洗脱时，对洗脱液的流速要求保持稳定。 [答案]　(1)a　a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快 (2)尼龙网和尼龙纱 (3)气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 (4)相同　保持稳定 (5)凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围　凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5 g (1)实验结果如果不理想，需要重做时，必须进行凝胶色谱柱的重新装填。一般情况下，凝胶不会与其他溶质发生任何作用，因此，在一次分离以后，稍加平衡就可以进行下一次的操作。平衡时，需用3倍柱体积的洗脱液过柱。 (2)如果实验操作中有一些杂质污染了色谱柱，可以用物质的量浓度为0.2 mol/L的氢氧化钠和物质的量浓度为0.5 mol/L的氯化钠混合液处理交联葡聚糖凝胶。 (3)如果凝胶长期不用，可以加入抑菌剂低温保存，使用时再进行充分的平衡。 点击进入 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第 1 部分 专 题 5 课题 3 理解教材新知 把握热点考向 应用创新演练 知识点一 知识点二 考向一 考向二 1.透析法分离蛋白质的目的是除去小分子 杂质。 2．利用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对 分子质量大的先洗脱出来，相对分子 质量小的后洗脱出来。 3．在电泳中，待分离样品中分子带电性质的差异以及分 子本身的大小、形状都会影响分子的迁移速度。 4．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移速率完全取决于分子 的大小。 5．蛋白质提取和分离的一般步骤是：样品处理与粗分 离、纯化和纯度鉴定。 6．在对蛋白质进行纯度鉴定时，使用最多的方法是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。 [自读教材·夯基础] 形状和大小 电荷 亲和力 1．蛋白质分离的理论依据 2．分离的方法 (1)凝胶色谱法：根据