FISH技术在白血病中应用~.pdfVIP

FISH 术在白血病中的应用 目前荧光原位杂交技术已被广泛用于遗传性疾病、肿瘤研究及临床诊断和治疗监测。在临床应用中， 荧光原位杂交技术凭借其较高的灵敏度和特异度 ，已在产前诊断、实体瘤 （乳腺癌、膀胱癌、宫颈癌、肺 癌）以及血液系统肿瘤的诊断和治疗检测中得到了迅速的发展。 血液系统肿瘤是我国十大高发肿瘤之一 ，随着对疾病发病机制的深入研究 ，发现细胞遗传学对肿瘤 型、诊断、治疗和预测预后都具有重要的意义。但常规的细胞遗传学分析（CC ）方法只能分析中期染色体， 而对间期细胞、复杂核型细胞和染色体微缺失无法进行诊断。而 FISH 技术弥补了 CC 在这方面的不足 ， 因此被广泛用于血液肿瘤的研究、诊断等方面。 在临床上对血液肿瘤的FISH 检测主要集中在以下几个方面： ①染色体异位形成的融合基因检测 如慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia ，CML ）的BCR-ABL 融合基因检测，急性 粒细胞白血病（acute myelocytic leukemia ，AML ）M3 中的 PML-RARA 融合基因检测和 M2b 中的 AML1-ETO 融合基因检测。对融合基因的检测不但有助于对疾病的诊断，还能帮助我们估计患者预后情况 以及选择有效的治疗方案。 ②基因缺失的检测 一些关键基因的缺失有助于我们对肿瘤进行诊断以及预后判断。但是目前的染色体显带技术 辨率低 ， 只有大于4.5 Mb 的缺失才能检测到，而 FISH 辨率高，可以弥补染色体显带技术用于检测微小缺失的 不足。在临床应用中，如通过荧光原位杂交发现慢性淋巴细胞性白血病患者的P53 基因缺失提示患者的预 后很差 ，疾病进展较早 ，且对联合化疗不敏感 ，多 生存期仅为3 个月。而同样在慢性淋巴细胞性白血病 患者中，如检测到13q 单一缺失则提示患者预后较好 ，中位生存期可达到133 个月。 ③对异性间造血干细胞移植的植入状态监测 目前异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem celtransplantation ，allo-HSCT)是治 疗血液系统恶性和非恶性疾病的有效手段。移植后动态监测供／受者混合性嵌合体比例变化判定移植是否 成功 ，对指导移植后治疗和预测复发具有十分重要的意义。FISH 技术具有操作简便、快速及结果敏感可 靠等优点 ，通过性染色体计数探针动态监测供／受者混合性嵌合体比例变化对异性异基因造血干细胞移植 后植入状态进行检测。 ④微小残留病灶（minima residual disease ，MRD ）的检测 白血病患者经化疗缓解后 ，体内的白血病细胞并未完全清除 ，仍残留一定 目的白血病细胞，这些残 留的白血病细胞是导致复发的根源。通过对肿瘤细胞特异的染色体异常进行跟踪监测，可间接了解体内白 血病细胞负荷 ，便于预测疾病进展和有无复发迹象。 下面我们介绍CLL、MDS、MM 相关的FISH 探针。 11 慢性淋巴细胞白血病(CLL) 慢性淋巴细胞白血病是高度异质性的血液系统恶性疾病，伴随培养刺激剂的应用和荧光原位杂交等检 测技术的发展，CLL 核型异常检出率逐渐提高。由于CLL 白血病细胞增殖低下 ，体外培养增殖慢 ，进入 裂中期的细胞少 ，传统的核型分析有困难。常规染色体显带技术仅 22%CLL 可检测到克隆性染色体异常 ， 由于加用B 细胞 裂刺激剂 ， 50%CLL 检测到克隆性染色体异常。 年来 ，随着间期FISH 技术的应用， CLL 染色体异常的检出率大大提高，可达到75%一80%。最常见的为13q- ，其次为+12、11q-、17p-、 t （14q32 ）、6q- ，对这些遗传学异常的检测可以预测疾病的预后和治疗反应情况。 ① 13q 缺失 13q 缺失是CLL 最常见的染色体异常 ，40%-60%的CLL 出现该异常。通常涉及长臂的1 区4 带 ，该 缺失区域与抗癌基因有关 ，大约 55％的 B-CLL 具有染色体 13q14 的缺失。早期研究提示肿瘤抑制基因- 视网膜母细胞瘤基因 RB1 位于此位点 ，del(13q14)可造成该基因的缺失。RB1 是CLL 的候选抑癌基因 ， 但 RB1 的纯和性缺失发生率较低 ，约为5%-10%。13q14.3 含D13S319、D13S272、D13S25 ，其中最 常见的缺失片段为 D13S272 ，并非位于 13q14.1-14.2