第2节HPLC仪器装置详解.pptVIP

第二节 HPLC仪器装置 一、HPLC仪器装置 1. 高压输液系统; 2. 进样系统; 3. 分离系统; 4. 检测系统; 此外还配有梯度洗脱、自动进样及数据处理系统等辅助装置。 (一) 高压输液系统 1. 储液器 2. 脱气器 超声波脱气或真空加热脱气。溶剂通过脱气器中的脱气膜，相对分子量小的气体透过膜从溶剂中除去(气泡会影响检测)。 3. 高压泵 是高压输液系统的核心部件。 要求： (1)? 密封性好; (2)? 输出液体压力高: 1.5?107 ? 4.5?107Pa; (3)? 输液流量稳定无脉动，精度0.1mL.min-1; (4)? 可调范围宽、耐腐蚀。 4. 梯度洗脱装置 在分离过程中逐渐改变流动相组成的装置。 (二)进样系统 有手动和自动两种进样方式。 HPLC主要采用旋转式高压六通阀进样。 进样装置包括两种： 1.隔膜注射进样 旋转式六通阀进样优点： (1) 进样量可变范围大。 (2) 进样准确，重复性好。 (3) 耐高压，宜于自动化。 缺点： 易造成色谱峰柱前扩展。 (三)分离系统 色谱柱，它是高效液相色谱仪的心脏。 2. 柱的填充 主要分为干法和湿法。一般大颗粒采用干法填充，小颗粒采用湿法填充。湿法填充一般采用匀浆法。 均浆法： 使溶剂密度和填充颗粒密度相近，此时颗粒沉降速度趋于零。常用的匀浆试剂有四氯乙烯、四溴乙烷和二碘甲烷等。 3.填充方法 填充时，按上述方法制作匀浆液，用流动相充满色谱柱及其延长管中，然后将匀浆液倒入匀浆填充器，在较高压力下迅速将其注入色谱柱内。要求填充速度快(防凝聚、沉降或结块)、且无空气进入(影响填充均匀性)。 (四)检测系统 液相色谱检测器包括紫外吸收、荧光、示差折光、蒸发光散射和电化学检测器等。 要求： 1.紫外吸收检测器(UVD) (1) 检测原理: (2) 优点 (1) 灵敏度较高的浓度型检测器； (2) 最小检测量可达10-8~10-12g； (3) 只对能产生紫外吸收的物质有响应； 几乎所有的有机物都有紫外吸收。 (4) 对温度和流量不敏感； (5) 可用于梯度洗脱。 (3) 缺点 要求流动相的截止波长较低，低于检测器的工作波长。 截止波长：流动相在此波长以上， 没有紫外吸收。 部分溶剂截止波长见书p345 表17-1 表2-1 几种主要溶剂的物理性质 2. 荧光检测器(FD) (1) 检测原理 (2) 优点 (1) 灵敏度极高的浓度型检测器， 其灵敏度比UV检测器高2~3个数量级， (2) 选择性极好, (3) 最低检出限可达10-12g.mL-1, (4) 专用型检测器，只对能产生荧光的物质有响应， (5) 可用于梯度洗脱。 主要用于稠环芳烃、甾族化合物、酶、氨基酸、维生素、色素、蛋白质等荧光物质的测定。 3.示差折光检测器(RID) (1) 原理 (2) 优点 (1) 通用型检测器，凡是与流动相折射率 不同的组分均可进行检测。 (2) 灵敏度较低的浓度型检测器， (3) 对温度和流速变化敏感， (4) 不能用于梯度洗脱。 4.蒸发光散射检测器(ELSD) 是基于光线通过被分离组分的微小的粒子时会产生光散射现象的原理设计的。 经色谱柱分离的组分随流动相进入雾化室，被高速的惰性载气喷成细小雾滴后进入蒸发器，流动相在高温被蒸发，剩下溶质颗粒，通过光路，产生的散射光由光电倍增管采集放大得到试样信号。 (2) 优点 (1) 灵敏度较高的质量型检测器， 灵敏度比示差折光检测器高。 (2) 通用型检测器， (3) 检测挥发性低于流动相的样品， (4) 可用于梯度洗脱。 5.电化学检测器 具有电化学氧化还原性质的化合物流经检测器发生电解，产生的电信号经放大而被检测。 主要适用于能导电的有电活性的硝基、氨基等基团的有机物的检测。 (2) 优点 (1) 高灵敏度浓度型检测器， (2) 只适合具有氧化还原性质的物质。 (3) 最低检出限可达10-9g.mL-1, (4) 不能用于梯度洗脱。 (3) 缺点 发生氧化还原反应的电极表面容易被蛋白质、表面活性剂等物质毒化，使氧化还原反应效率变差。 (4) 分类 分四类： 电导检测器 库伦检测器 伏安检测器 安培检测器 应用最广 6.质谱检测器 组分分离后进入质谱仪，在质谱仪中首先被离子化，再在加速电压作用下进入质量分析器进行质量分离，分离后按质量大小记录质谱图，最后，根据质谱峰的位置和强度对组