猪伪狂犬病毒纳米PCR检测方法的建立.pdf

猪伪狂犬病毒纳米PCR检测方法的建立 张悦勇 ～，南文龙 ，秦立得 ，巩明霞 ，吴发兴 ，单 虎 ，陈义平 (1．中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2．青岛农业大学，山东青岛 266109) 摘 要 ：[目的]快速灵敏检测猪伪狂犬病毒 (PRV)[方法 】根据PRVgB基因设计特异性引物，建立了PRV 纳米PCR检测方法。[结果]PRV纳米PCR方法的最低检 出限为 10拷贝 ／ ，其敏感性比未添加纳米金的对照 PCR提高100倍 ；建立的纳米PCR与猪细小病毒、猪圆环病毒II型、猪繁殖与呼吸综合征病毒等常见猪病毒性 病原均无交叉反应。应用纳米PCR和PRV国家标准中的PCR方法，对2014--2016年期间采集自17个省市发 病猪场的 148份临床样品进行平行检测，PRV纳米PCR的阳性检 出率为49．3％ (73／148)，PRV 国标PCR方法 的阳性检出率为23．6％ (35／148)，并且PRV纳米PCR检测为阳性，而PRV国标PCR方法检测为阴性的38份 样品，测序结果均确认为PRV 阳性。【结论]本研究建立的纳米PCR检测方法敏感特异，可用于猪伪狂犬病的 病原学检测。 关键词 ：猪伪狂犬病毒 ；纳米PCR；gB基因 中图分类号 ：$852．651 文献标识码 ：B 文章编号 ：1005．944X (2017)03—0102．04 D0I：10．3969~．issn．1005—944X．2017．03．026 ANanoPCRAssayforDetectionofPseudorabiesVirus ZhangYueyong’29NanWenlong。，QinLide，GongMingxia，WuFaxing。，ShanHu2，ChenYiping (1．ChinaAnimalHealthnadEpidemiologyCenter，Qingdao，Shandong 266032： 2．QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao；Shandong 266109) Abstract：[Objective]InordertodeveloparapidandsensitivemethodfordetectingPseudorabiesvirus(PRV)． [Methods]AnanoPCRassayofrdetectionofPRVwasdevelopedwithapairofspecificprimersthatweredesigned basedonsequenceofgBgene．[Results]Resultsshowedthedetectionlimitofthisassaywas10copies／pL，sensitiviyt ofwhichwas100timeshigherthna conventionalPCRassaythatnogoldnanoparticlewasadded．Goodspecificiyt was alsoidentifiedthattherewasnocrossreactionwithothercommonviralpathogensofswinesuchasporcineparvoviurs (PPV)，porcinecircovirustype2 (PCV2)，porcinereproductivenadrespiratorysyndromevirus(PRRSV) ．Using PRV nna oPCRandnationalstnadardPCRtestofgBgene，148clinicalsamplescollectedfrom 17differentareasduring 20l4-2016wereconductedparalleldetection．ThepositiveratesbynanoPCR na dnationalstnadardPRV were43．5％ (73／148)and27．2％ (35／148) ．38samplestestednegativebynationalstandardPRV presentedapositiveresult whenusingthemehtodofnano