紫外可见分光光度计基本知识.ppt

测定试样溶液的吸光度，需先用参比溶液调节透光度（吸光度为0）为100%，以消除其它成分及吸光池和溶剂等对光的反射和吸收带来的测定误差。 三、参比溶液的选择 参比溶液的选择视分析体系而定，具体有： 1．溶剂参比 试样简单、共存其它成分对测定波长吸收弱，只考虑消除溶剂与吸收池等因素； 2．试样参比 如果试样基体溶液在测定波长有吸收，而显色剂不与试样基体显色时，可按与显色反应相同的条件处理试样，只是不加入显色剂。 3．试剂参比 如果显色剂或其它试剂在测定波长有吸收，按显色反应相同的条件，不加入试样，同样加入试剂和溶剂作为参比溶液。 4. 平行操作参比 用不含被测组分的试样，在相同的条件下与被测试样同时进行处理，由此得到平行操作参比溶液。 测定方法 一、 单组分定量方法 单组分是指样品溶液中含有一种组分，或者是在混合物溶液中待测组分的吸收峰与其他共有物质的吸收峰无重叠。 其定量方法包括校准曲线法、标准对比法和吸收系数法。 1 校准曲线法 方法：配制一系列不同含量的标准溶液，选用适宜的参比，在相同的条件下，测定系列标准溶液的吸光度，作A-c曲线，即标准曲线，也可用最小二乘数处理，得线性回归方程。 在相同条件下测定未知试样的吸光度，从标准曲线上就可以找到与之对应的未知试样的浓度。 2 标准对比法 即将待测溶液与某一标样溶液，在相同的条件下，测定各自的吸光度，建立朗伯-比尔定律，解方程求出未知样浓度与含量。 As=Kcs Ax=Kcx 紫外-可见吸收光谱的应用 紫外-可见吸收光谱除主要可用于物质的定量分析外，还可以用于物质的定性分析、纯度鉴定、结构分析。 1.定性分析 先用标准样品扫描谱图，在扫待测样品的谱图。拿两者进行比较，可进行定性。但此方法误差 比较大。 2.纯度的鉴定 用紫外吸收光谱确定试样的纯度是比较方便的。 如蛋白质与核酸的纯度分析中，可用A280/A260或A230/A260的比值，鉴定其纯度。 蛋白质浓度 ＝ 1552×A280－757.3×A260 (ug/ml) DNA浓度 ＝ 62.9×A260－36.0×A280 (ug/ml) 蛋白质浓度 ＝ 183.0×A230－75.8×A260 (ug/ml) DNA浓度 ＝ 49.1×A260－3.48×A230 (ug/ml) 3.结构分析 紫外-可见吸收光谱一般不用于化合物的结构分析，但利用紫外吸收光谱鉴定化合物中的共轭结构和芳环结构还是有一定价值。 例如，某化合物在近紫外区内无吸收，说明该物质无共轭结构和芳香结构。 可对物质进行定性，定量分析。 广泛的应用在冶金地质，机械制造，环境保护，生物化学，医学卫生，临床检验，食品卫生，药品检验，农业化学等领域的生产。 应用范围 北京普析通用仪器有限责任公司 Beijing Purkinje General Instrument Co.,Ltd. 紫外可见分光光度计 基本知识 ?  紫外-可见分光光度法 紫外-可见吸收光谱 朗伯-比耳定律 紫外-可见分光光度计 分析条件的选择 测定方法 紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visible spectrophotometry, UV-VIS) 按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外-可见分光光度法。 它是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析, 所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。 紫外-可见分光光度法的特点： 1 与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快; 2 灵敏度高; 3 ?选择性好; 4 精密度和准确度较高; 5 用途广泛。? 紫外-可见吸收光谱 1. 物质对光的选择性吸收 物质对光的吸收是选择性的，利用被测物质对某波长的光的吸收来了解物质的特性，这就是光谱法的基础。 通过测定被测物质对不同波长的光的吸收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范围的吸收曲线。 在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长λmax进行物质含量的测定。 影响紫外-可见吸收光谱的因素 物质的吸收光谱与测定条件有密切的关系。测定条件（温度、溶剂极性、pH等）不同，吸收光谱的形