制药生物技术.ppt

1、什么是生物制药？生物制药与化学合成制药的区别？ 一、实验目的 1、了解管碟法的原理。 2、掌握二剂量法测定抗生素效价单位的技术和计算方法。 二、 实验原理 福斯特(J.W.Foster，1942)和施密特(W.H.Schmidt，1944)等曾用比浊法和稀释法测定青霉素的效价。 效价是衡量抗菌素抗菌效能的标准，其单位可分为两大类：①稀释单位。将1毫克抗菌素配制成溶液，在一定条件下进行稀释，能抑制某一病菌生长的最高稀释度作为1毫克抗菌素中所具有的单位。②重量单位。将纯净的抗菌素重量直接作为抗菌效能的标准，即1微克相当于1个单位。 1944年国际联盟卫生组织决定，将1个牛津单位相当于0.6微克氨苄青霉素钠盐所具有的抗菌效能作为1个国际单位，即1毫克氨苄青霉素钠盐相当于1667个国际单位。 二剂量-管碟扩散法（戴维斯 B.D.Davis，1945） 根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系。 三、实验方法 1、材料 （1）细菌：金黄色葡萄球菌。 （2）培养基：效价检定用培养基（上层、底层）。 （3）抗生素：抗生素检品及标准品（高剂量、低剂量，高剂量与低剂量之比为2:1）。 （4）试剂与器材：灭菌生理盐水，无菌平皿，牛津杯，无菌吸管，镊子，滴管，直尺。 标准品: 链霉素高剂量：500μg/ml (1000U/ml)；低剂量：125μg/ml (125U/ml)待测样：羧苄青霉素高剂量： 500μ g/ml（？）低剂量： 125μg/ml（？） 实验二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 1．掌握电泳技术原理 2. 学习SDS测定蛋白质分子量的原理。 2．掌握SDS的操作方法。 三、方法步骤 1、实验试剂的准备 （1）浓缩胶、分离胶、电泳缓冲液的配制 （2）30% Acr-Bis溶液的配制 （3）10%SDS的配制 2、浓缩胶与分离胶浓度的选择 3、灌胶（分离胶与浓缩胶的灌制） 4、电泳（电压的选择） 5、拨胶 6、染色 7、脱色 8、成像 9、绘制标准曲线计算待测蛋白质的分子量大小。 一、目的 （1）掌握不同的测定蛋白质含量的方法及原理。 （2）比较考马斯亮蓝法及双缩脲法测定蛋白质的差异。 三、方法 （1）考马斯亮蓝G-250溶液和双缩脲试剂的配制 （2）牛血清白蛋白溶液及待测液的配制 （3）标准曲线的绘制 （4）待测液浓度的计算 考马斯亮蓝法——A595nm * 蛋白质分离纯化 * 兰州理工大学生命科学实验中心 生化技术理论与实践实验 张伟杰 王永刚 实验一 抗生素效价的测定 2、抗生素的种类及成分？ 自1940年青霉素应用于临床以来，抗生素的种类已达几千种，在临床上常用的亦有几百种，主要是从微生物的培养液中提取的或者用合成、半合成方法制造。β-内酰胺类，四环素类，抗真菌抗生素，抗肿瘤抗生素等。3、为什么要进行抗生素效价的测定？ 通过测定抗生素效价来判定其质量好坏和有效成分含量的杀菌剂生物测定。 抗生素效价：抗生素是一种生理活性物质，它对生命现象很敏感，可以用抗生素的生物效能表示它的效价，其最小效价单元就叫做“单位”(U)。经由国际协商规定出来的标准单位，称为“国际单位”(IU) 当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的抑菌圈。 取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入检品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。 （1）配制标准品溶液及样品溶液；（2）制备菌悬液； （3）制备平板；（4）放置小钢管，并标记。 在培养基平板底部作好相应标记，用弯头镊子在每个培养皿中等距离放入4个牛津杯，“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”标记。 （5）用滴管分别将高、低浓度的标准品和样品溶液加入到牛津杯中，以滴满为度，换上皿盖。 SH→UH→SL→UL（二剂量法） （6）培养。 （7）测量抑菌圈直径，计算抗生素效价。 2、步骤 ?注意事项： ①供试菌：要求对被测定物质有一定敏感性，生长快速，不易被杂菌污染，不易发生变异；容易制成悬浮液，并有一定抗热性。 ②培养基：琼脂浓度要适度，一般为1.5%，培养基厚薄对形成抑菌圈大小影响较大，一般在直径9厘米培养皿内注入5毫升含菌培养基为宜。培养基的pH值应调到供试菌生长所要求的范围内。 ③培养条件：药剂处理后的培养基平面，要在低温下放置一定时间(一般5℃下4～6小时)，使药剂充分扩散，然后在适温下培养，以