活体细胞线粒体形态活性荧光染色试剂盒产品说明书（中文版.PDFVIP

活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集在线粒 体，并呈现红色，用于分析和观察线粒体活性与形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方 法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体（动物、人体、昆虫等）的 形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定， 滞留持久。 技术背景 线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体大量存在于 代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌，肝，肾等器官和组织的细胞中。大量制备线粒体就是从这些器官组织 中提取，或从组织培养细胞中提取。在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体荧光 探针 ，是一种含有 （ ）氯甲基基团的荧光染料，自由通过细胞膜，选择性地 MitoTracker RED 硫醇 Thiol 聚集在线粒体。它可以对活细胞进行直接染色，在 580nm 波长可以清晰看到被染成红色的线状或颗粒小体 的线粒体。并可以分析线粒体膜电位，以检测线粒体活性。 产品内容 清理液（Reagent A ） 毫升 固着液（Reagent B ） 毫升 预备液（Reagent C ） 毫升 染色液（Reagent D ） 微升 产品说明书 1 份 保存方式 保存染色液（Reagent D ）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6 月 用户自备 完全细胞培养液：用于染色后培养液更换 24孔细胞培养板：用于贴壁细胞染色的容器 1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器 微型台式离心机：用于沉淀细胞 培养箱：用于染色孵育 （共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析 1 实验步骤 实验开始前，将－20 ℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent D）置入冰槽里融化，然后分别移 出 微升预备液（Reagent C ）和 微升染色液（Reagent D ）到新的 1.5 毫升 离心管，标记为 染色工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。 一、 贴壁细胞标准染色 1． 准备 1 个细胞培养 24 孔板的待测细胞，细胞铺满率达 70 ％ （注意： 可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm 培养皿，和其它培养孔板，见注意事项 12 ） 2 ． 小心抽去细胞培养液 3 ． 小心沿着孔壁加入 500 微升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔，覆盖培养孔表面 4 ． 小心加入 微升含有预备液（Reagent C ）和染色液（Reagent D ）的 染色工作液，小心摇动培养板，使其混匀（注意：参见注意事项 9 和 10 ） 5 ． 放进 37℃细胞培养箱里孵育20 分钟 6 ． 小心抽去含有染色工作液 的细胞培养液 7 ． 小心沿着孔壁加入 1 毫升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔 8． 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长 579nm，散发波长 599nm （线粒体呈现红色） 二、 贴壁细胞快速染色 1． 准备 1 个细胞培养 24 孔板的待测细胞，细胞铺满率达 70 ％ （注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm 培养皿，和其它培养孔板，见注意事项 12 ） 2． 直接加入 微升（1：500 容量比）含有预备液 （Reagent C ）和染色液（Reagent D ）的染色工作液到 1 毫升培养液里，小心摇动培养板，使其混匀（注意：参见注意事项 9 和 10 ） 3． 放进 37℃细胞培养箱里孵育20 分钟 4． 小心抽去含有染色工作液的细胞培养液 5． 小心沿着孔壁加入 1 毫升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔 6． 即刻在倒置荧光显微镜