分子生物学解答.docVIP

分子生物学答案 一、名词 1、鸟枪法（Shotgun method）：使用基因组中的随机产生的片段作为模板进行克隆的方法。使用限制性内切酶将带有目的基因的DNA链切成若干小段再使用DNA连接酶将其整合到载体的基因中并使其表达tryptophane operon）：负责色氨酸的生物合成，当培养基中有足够的色氨酸时，这个操纵子自动关闭，缺乏色氨酸时操纵子被打开，trp基因表达，色氨酸或与其代谢有关的某种物质在阻遏过程（而不是诱导过程）中起作用。酶切图谱（Macrorestriction Map）：描述限制性内切酶的酶切点的位置和距离信息的图谱。原位杂交（in situ hybridization）将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交结构域（domain）这种相对独立的区域性结构就称为结构域。Southern blotting）：又称为Southern杂交即用放射性标记的探针与靶DNA进行杂交的技术。基因组文库genomic library）：用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA，可以得到大量的基因组DNA片段，然后将这些DNA片段与载体连接，再转化到细菌中去，让宿主菌长成克隆。这样，一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段，整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库粘性末端cos site-carring plasmid）：当一种限制性内切酶在一个特异性的碱基序列处切断DNA时，就可在切口处留下几个未配对的核苷酸，叫做粘性末端一致序列conserved sequence）：遗传物质里的片段极少发生突变而且在不同生物中广泛存在在几种不同类型生物体中非常相似的DNA序列。科学家认为这些跨物种的相似性证明了某个特殊的基因完成了一些许多生命形式所必须的基本功能，因此在进化过程中保留了这些序列，而很少发生突变。序列位置标签（Sequence Tagged SiteSTS）一段短的DNA序列（200500个碱基对），这种序列在染色体上只出现一次，其位置和碱基顺序都是已知的。在PCR反应中可以检测STS来，STS适宜于作为人类基因组的一种地标，据此可以判定DNA的方向和特定序列的相对位置。是来源于不同物种但能识别相同DNA序列的限制性内切酶，切割位点可以相同也可以不同即能切割产生相同末端的限制性内切酶，一般是指能产生相同粘性末端的限制酶。这一类的限制酶来源各异，识别的靶字序列也不相同，但产生相同的粘性末端蛋白激酶 A (protein kinase A，PKA)又称依赖于cAMP的蛋白激酶A，是一种结构最简单、生化特性最清楚的蛋白激酶。PKA全酶分子是由四个亚基组成的四聚体, 其中两个是调节亚基简称R 亚基，另两个是催化亚基简称 C 亚基。R亚基的相对分子质量为4955kDa, C亚基的相对分子质量为40kDa,总相对分子质量约为180kDa；全酶没有活性。在大多数哺乳类细胞中, 至少有两类蛋白激A, 一类存在于胞质溶胶, 另一类结合在质膜、核膜和微管上。激酶是激发底物磷酸化的酶,所以蛋白激酶A的功能是将ATP上的磷酸基团转移到特定蛋白质的丝氨酸或苏氨酸残基上进行磷酸化, 被蛋白激酶磷酸化了的蛋白质可以调节靶蛋白的活性。一般认为, 真核细胞内几乎所有的cAMP的作用都是通过活化PKA,从而使其底物蛋白发生磷酸化而实现的。蛋白激酶A（Protein Kinase A，PKA）：由两个催化亚基和两个调节亚基组成（图8-15），在没有cAMP时，以钝化复合体形式存在。cAMP与调节亚基结合，改变调节亚基构象，使调节亚基和催化亚基解离，释放出催化亚基。活化的蛋白激酶A催化亚基可使细胞内某些蛋白的丝氨酸或苏氨酸残基磷酸化，于是改变这些蛋白的活性，进一步影响到相关基因的表达。在真核细胞核内可以分离到一类含量很高，分子量很大但不稳定的RNA，称为核内不均一RNA（heterogenous nuclear RNA,hnRNA），其平均分子长度为8-10b，长度变化的范围从2b左右到14b左右。比mRNA的平均长度（1.8-2b）要大4-5倍。估计hnRNA仅有总量的1/2转移到细胞质内，其余的都在核内被降解掉。Hn RNA真核细胞核内一组转换极快、大小不一、分子量多超过107的RNA称为不均一核RNA，包括基因转录的直接产物和部分加工产物。hnRNA的结构有以下特点： (1) 5′端有帽结构； (2) 3′端有poly（A）尾巴；(3) 帽结构后有3个寡聚U区，每个长约30nt；(4) 有重复序列，位于寡聚U区后面；(5) 有茎环结构，可能分布于编码区（非重复序列）的两侧；(6) 非重复序列中有内含子区。核仁，是近来生物学研究的热点。已证明有多种功能，反义snoRNA指导rRNA核糖甲基化。核仁小RNA