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邻二氮菲法测定蔬菜中铁的含量 摘 要 用邻二氮菲分光光度法直接测定蔬菜中的铁含量，方法简便、快速、准确，为指导人们合理食用蔬菜进行补铁及进一步开发蔬菜产品提供了可靠的理论依据[1 2]。 关键词 蔬菜 铁含量 邻二氮菲 1. 前言2. 实验目综合运用所学知识，用仪器分析法测定含量练习灵活运用各种基本操作和查阅资料的能力3. 实验原理pH值4～6的条件下，以盐酸羟胺将三价铁还原为二价铁，二价铁再与邻二氮菲（phen）生成桔红色络合物［3］510nm测定蔬菜中铁的含量。 盐酸羟胺还原三价铁的反应如下： 2 Fe3++2NH2OH·HCl→2 Fe2++N2+2H2O+4H++2Cl- 邻二氮菲与二价铁的反应式如下： Fe2+ + 3(phen) =Fe(phen)3 4. 实验5. 实验材料及试剂5. 1实验材料及其处理 新鲜菠菜（Spinacia oleracea）、花椰菜（Brassica oleracea L. var. botrytis L.）、芹菜（Apium graveolens）、黄瓜（Cucumis sativus Linn.）各0.5Kg 将菠菜、花椰菜、芹菜、黄瓜洗净、晾干，准确称取100.0g，用剪刀剪碎，放在蒸发皿中，放于电磁炉上加热至没有浓烟为止。然后放到马弗炉高温烘烤若干小时，最后取出冷却至室温。将上述试样各加入5mL1:1稀释的HCI，至全部溶解。若不溶解可加入数滴硝酸，若还不溶解在酒精灯上加热，冷却后过滤。将滤液转移到50mL的容量瓶中，定容至刻线，待用。 5. 2 实验试剂及其配制 200ug/mL的铁标准溶液：准确称取0g 分析纯FeSO4 ·(NH4)2 SO4·6H2O，置于烧杯中用15mL 2mol/L盐酸溶解后移入0mL容量瓶中，定容，摇匀用移液管准确移取5mL 200ug/mL 的铁标准溶液于50mL容量瓶中，定容，摇匀用移液管准确移取浓盐酸10mL于50mL容量瓶中，定容，摇匀。用移液管准确移取浓盐酸25mL于50mL容量瓶中，定容，摇匀。10%的盐酸羟胺：称取盐酸羟胺固体50g，用量筒量取400mL水加热溶解，转移至500mL容量瓶中，定容，摇匀0.2%的邻二氮菲：准确称取邻二氮菲1.0g，置于烧杯中加热溶解后，移入500mL容量瓶中，定容，摇匀称取CH3COONa·3H2O）固体68g，置于烧杯中30ml冰醋酸溶解，加水溶解后，移入500mL容量瓶中，定容，摇匀。1.429g/mL）。 6. 实验操作步骤 6.1 标准曲线的绘制 在6个50mL容量瓶中，按下表由上到下一次加入各试剂。对各容量瓶均用水稀释至刻度，摇匀。 容量瓶编号 1 2 3 4 5 6 20ug/mL铁标溶液/mL 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 10%的盐酸羟胺溶液/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 2min后,1mol/L的醋酸钠溶液/mL 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 0.2%的邻二氮菲溶液/mL 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 用分光光度计，在波长510nm处用1cm的比色皿，以蒸馏水为参比，测定上述各溶液的吸光度,将数据填入表1，以含铁量为横坐标，吸光度A为纵坐标，根据表1的数据绘制标准曲线。 6.2 样品中铁含量的测定 取四个50mL的容量瓶，依次加入待测样品液5.0mL,10%的盐酸羟胺溶液1.5mL,摇匀，2分钟后加1mol/L的醋酸钠溶液5.0mL,0.2%的邻二氮菲溶液1.5mL,定容。在分光光度计上，于波长510nm处用1cm的比色皿，以蒸馏水为参比，测定溶液的吸光度值，将数据填入表2。 6.3 回收实验 取四个容量瓶分别编号1,1’，2,2’，3,3’，4,4’,分别在1,1’，2,2’,3,3’,4,4’中加入菠菜、花椰菜、芹菜、黄瓜溶液3mL，分别移入50mL的容量瓶中，再在1’，2，’3’，4’中加入1mL20ug/mL的铁标溶液，然后分别在两者中加入1.5mL10%的盐酸羟胺溶液， 2min后，再加入5mL 1mol/L的醋酸钠溶液，然后分别加入0.2%的邻二氮菲溶液1.5 mL，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。在分光光度计上，于波长510nm处用1cm的比色皿，以蒸馏水为参比，测定上述溶液的吸光度值，将数据填入表3。 7. 结果及计算 表1 标准曲线测量数据及记录结果 （A1,A2,A3为同种试验材料的三个比色皿重复，下面出现与此处意义相同） 编号 1 2 3 4 5 6 铁的含量/ug 0 40 80 120 160 200 吸光度 A1 A2 A3 平均值 表2 铁含量测量数据及记录结果 菠菜 花椰菜 芹菜 黄瓜 A1