细胞生物学实验策画(王金发).pdf

验 设 计 第一章 细胞概述 1. Miller 证明地球上的有机分子自动合成的装置(图E1-1) : Miller 推测,大气层中含有甲烷和氨,也含有氢和水 蒸气。他把这些气体一起放入实验装置中（图E1 -1 ）,然后 一直与电火花接触,在这一装置中靠沸水提供水蒸气。反应一 个星期后分析产物。令人惊讶的是,产物中有大量的有机物, 包括尿素、生物和非生物的氨基酸等, 实验证明了在雷电作 用下能够利用大气中的分子合成有机分子。也就是说在进化 的某一过程中地球上有了构成细胞生命物质的基本元件:氨 基酸、碱基、单糖等, 为细胞的起源作好了物质准备。 图 E 1 - 1 M i l l er 证 明地球上的有机分子 自动合成 的装置 1 P D F文 件用使 p d f F a c试t用o版r y本 创建 第二章 细胞生物学研究方法 1. 1975 年英国科学家Milstein 和Kohler 发明的单克隆抗体技 术(monoclonal antibody technique) 的实验原理和技术细节有哪些? :1975 年英国科学家 Mil stein 和 Koh l er 发明了单克隆 抗体技术, 因此获得 1984 年诺贝尔医学奖。它是将产生抗体 的单个 B 淋巴细胞同肿瘤细胞杂交的技术，其原理是: B 淋 巴细胞能够产生抗体, 但在体外不能无限分裂;而瘤细胞虽 然可以在体外进行无限传代,但不能产生抗体。将这两种细胞 融合后得到的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性, 既能 产生抗体,又能无限增殖。 图E2-1 所示是单克隆抗体制备流程。首先用一种抗原 注射小鼠，引起产生特 抗体的细胞大量增殖,取出小鼠的脾, 分离产生抗体的淋巴细胞，同骨髓瘤细胞进行融合，在 HAT 培养基上进行初步筛选后，经过进一步鉴定,得到生产单克隆 抗体的细胞。 2 P D F文 件用使 p d f F a c试t用o版r y本 创建 图 E 2 - 1 单克隆抗体技术 筛选用的 HAT 培养基是选择性培养基，含有氨基喋呤 (aminopter in,A) 、次黄嘌呤(hypoxanthine,H) 和胸腺嘧啶 (thymidine,T) 。在HAT 培养基中，只有肿瘤细胞和正常细胞 融合形成的杂交瘤细胞才能生存，而未融合的肿瘤细胞、正 常细胞及非肿瘤细胞和正常细胞融合形成的细胞都会死亡。 因为，正常的未融合细胞具有核酸合成主要通路和旁路所必 需的酶但不能在体外长期生长；突变后的肿瘤细胞只具有 RNA 和 DNA 合成所必需的主通路的酶，而缺乏利用胸腺嘧 3 P D F文 件用使 p d f F a c试t用o版r y本 创建 啶核苷合成 DNA 的胸腺嘧啶核苷激酶(TK)或缺乏利用次黄 嘌呤合成 RNA 的磷酸核糖转移酶(HGPRT) 。当这些细胞的 核酸合成主通路被培养基中氨基喋呤阻断后，则因核酸合成 障碍而死亡。只有肿瘤细胞和具有合成旁路酶