动物细胞融合与单克隆抗体单抗详细2014.pptVIP

?抗体的不纯性 B淋巴细胞与抗体 ?怎么才能得到纯的抗体? ?光纯还不行,还要大量.怎么办? ?但，有问题: ?找，什么细胞能无限繁殖呢? ?思路就出来了: 1.1单克隆抗体的概念 如何大量生产单克隆抗体？ 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 1、动物特异性免疫 2、分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 3、细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 结合同位素的单抗 动物细胞工程小结 动物细胞培养：原理、营养、条件、过程、细胞生长特点、结果、应用 动物细胞融合：原理、诱导方法、过程、应用 单克隆抗体的制备：原理、过程、特点、应用 核移植与克隆动物：供体、受体、核移植方法、克隆动物的方法、克隆动物的遗传特性、应用 动、植物细胞工程的比较：植物组培技术与动物细胞培养技术、植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术 B淋巴细胞 从小鼠腹腔中提取 骨髓瘤细胞 多种融合细胞(共3种类型组合) (融合) 注射特定抗原 杂交瘤细胞(多种类型) 鼠 脾脏 提取 在选择培养基上筛选 克隆培养 多种杂交瘤细胞 特异性杂交瘤细胞 (所需的1种类型) 多孔细胞板上筛选 体外： 体内： 培养 从培养基中培养并提取 单克隆抗体 提取 1. 3、单抗隆抗体的应用 ①作为诊断试剂 ②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病 用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。 ③用于治疗疾病和运载药物 利用同位素标记单抗，在特定组织成像 制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。 单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。 -----生物导弹 单抗 放射性同位素 生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物 课堂小结: 动物细胞融合过程 单克隆抗体制备过程 两个过程 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法:灭活病毒 一个新细胞:杂交瘤细胞 一个优势:单克隆抗体,特异性强、灵敏度高的优势 克服远缘杂交障碍 使远缘杂交成为可能 意义 培育作物新品种 制备单克隆抗体 用途 获得杂种植株 获得杂种细胞或细胞产物 结果 聚乙二醇、离心、振动、电激、 聚乙二醇、离心、振动、电激、灭活病毒 诱导方法 去除细胞壁 分散成单个细胞 融合前提 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 原理 植物体细胞杂交 动物细胞融合 项目 1970年，有两位科学家 做了一个著名的实验： 人—鼠细胞融合的实验， 以证明细胞膜上的蛋白 质分子是运动的。 人—鼠细胞是怎样实现融合的？动物细胞融合有什么实践意义呢？ 一、动物细胞融合:（也称：细胞杂交） 1、概念: 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程. （也称：杂交细胞) 2、原理： 利用细胞膜的流动性 正在融合的 淋巴细胞与骨髓瘤细胞 正在融合的鸡血细胞 细胞膜的流动性 3种类 ⑴自然发生： 受精卵 ⑵人工诱导： 利用诱导剂诱导动物细胞融合 诱导因素：聚乙二醇、灭活的病毒或电激等。 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 细胞A 细胞B 杂种细胞 灭活的病毒 物理法 化学法 仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒 动物细胞融合 为什么用灭活的病毒作为诱导剂？ 不灭活的病毒能作为诱导剂吗？ 仙台病毒 紫外线 灭活 丧失感染活性（不感染细胞） 保留融合活性（诱导细胞融合） ①什么是病毒的灭活？ 灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。 ②灭活病毒诱导细胞融合的原理 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合 不同DNA的两个细胞 灭活病毒诱导细胞融合 融合后的细胞进行有丝分裂 4.动物细胞融合过程 细胞A 两个一样的杂交细胞 细胞B 杂交细胞（单核） (融合) (有丝分裂) 6、用途： 主要用于诱导形成杂交瘤细胞， 制备单克隆抗体 5、优点: 使远缘杂交成为可能,打破物种间的生殖隔离 传统制备抗体的方法 向动物体内反复注射某种抗原 动物产生抗体 从动物血清中分离抗体 特点：产量低