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研究报告 第12期 第36卷 分析化学(FENXlHUAXUE) 2008年12月 ChineseJournalof Chemistry 1614—1618 Analytical 磁性无机一生物复合粒子敏感膜新型电流型免疫传感器的研究 高会玲李建平。 (桂林工学院材料与化学工程系，桂林541004) 摘要合成了磁性Fe，0。纳米粒子，利用3．氨基丙基--L氧基硅烷(AlaS)进行硅烷化，形成表面带有氨基 的磁性Fe，0。纳米复合粒子，再用戊二醛将羊抗人免疫球蛋白G抗体(anti．IgG)固定在该磁性粒子表面，通过 磁力将其修饰于固体石蜡碳糊电极表面制作成免疫传感器。与标记HRP的二抗体anti．IgG结合，以对苯二 酚作为电子媒介体，实现对人免疫球蛋白G(IgG)的定量检测。IgG测定线性范围为2．5—400彬L，检出限 为0．75峙／L。该免疫传感器制作简单，成本低，表面更新方便，可用于临床血清检测。 关键词磁性纳米粒子，免疫传感器，人免疫球蛋白G 1 引 言 电化学免疫传感技术可直接、快速、灵敏地测定试样中的抗原或抗体，因所需仪器设备相对简单，在 临床医学中具有广泛的应用前景。在电化学免疫传感器中免疫试剂的固定是制作免疫传感器的关 键¨。J。常用的方法有物理吸附…、交联【6】、自组装【4】、包埋r7|、聚合物【51及溶胶凝胶固定【31等。然而， 有些同定方法相当复杂，所用试剂昂贵，稳定性差易导致抗原或抗体活性失活，电极的使用寿命短，不易 更新等。近年来，以纳米粒子构建各种纳米结构功能膜越来越受到人们的青睐【4’8“0I，磁性纳米粒子由 于其特殊的物理化学性质使其成为构造电化学传感器中固定免疫分子的理想载体…J。在磁性材料中 Fe，O。磁性纳米粒子是研究较多的一种，该纳米粒子具有好的生物相容性、超顺磁性、低毒性以及易合 纳米粒子固定羊抗人IgG抗体制作的免疫传感器，但其合成步骤多，粒度大，测量时空白电流较高。 本研究利用Fe，O。磁性纳米粒子表面的活性基团与具有功能团的试剂直接反应，共价同定抗体，制 成表面同定有羊抗人IgG抗体(anti—lgG)的磁性无机一生物复合粒子，通过磁力将其吸附同定在固体石 蜡碳糊电极(SCPE)表面，制成了免疫传感器。采用双抗体夹心免疫分析法测定目标抗原人IgG抗原 (IgGAg)。纳米粒子具有极佳的比表面积，能增加固定生物分子的数量，从而实现信号的放大；磁性纳 米粒子有较低的介质传输阻力，使生物分子与基体之间的反应加快；可以提高生物分子的稳定性及免疫 活性并能在外加磁场作用下方便地选择分离。由于生物活性物质直接固定在Fe，0。的表面，增强了酶 的活性位点与电极之间的电子转移能力，灵敏度大大提高。该免疫传感器具有制作简单、价廉、灵敏度 高、线性范围宽、表面易更新等特点，可用于直接测定人血清中的IgGAg。 2实验部分 2．1仪器与试剂 CHl660B电化学工作站(上海辰华仪器有限公司)，三电极系统：工作电极为自制的磁性无机一生物 复合粒子敏感膜免疫传感器，参比电极为饱和甘汞电极，对电极为铂丝电极；pHS-2C型精密酸度计(上 海雷磁精密仪器有限公司)；H600型透射电子显微镜(日本Hitachi公司)；NanoZS90型纳米粒度及 Zeta电位分析仪(英国Malvem公司)。 HRP)购于北京拜尔迪生物技术有限公司；3一氨基丙基=三乙氧基硅烷(APS，98％)购于AlfaAesar。USA； 2008-03-23收稿；2008—10—13接受 究生教育创新计划项目(No．2007105960703M11)资助 ·E—mail：likianping@263．net 万方数据万方数据 第12期 高会玲等：磁性无机一生物复合粒子敏感膜新型电流型免疫传感器的研究 1615 试剂均为分析纯；实验中所用水均为二次蒸馏水(18．2MQ cm)。 2．2免疫传感器的制作 2．2．1 SCPE的制作及磁性纳米粒子的合成参照文献[9]