久实牌蝙蝠蛾被毛孢对糖尿病肾病大鼠肾组织HIF1α及VEGF表达的影响.docVIP

久实牌蝙蝠蛾被毛孢对糖尿病肾病大鼠肾组织HIF-1α及VEGF表达的影响 青海久实公司突破了青藏高原上难以再生、难以重现、难以复制珍贵稀有可食动植物资源的历史，拥有国家级发明专利技术的自主知识产权——久实牌蝙蝠蛾被毛孢菌粉的生产方法（专利申请 号：200710050273.7）。公司“久实宝”系列产品生产所用菌种，经过国家权威机构中国科学院微生物研究所的检测，鉴定结果为蝙蝠蛾被毛孢为唯一无性型久实牌蝙蝠蛾被毛孢[鉴定号：（2007）微检字第101号]，同时被中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的要求该产品菌种列入收藏（保藏中心登记入册 编号GMCCNo.2126）。蝙蝠蛾被毛孢（Coydyceps Sinensis）仅分布于我国青藏高原及其边缘地区海拔3000-6000米的高寒草甸阴湿地区。是寄生于蝙蝠蛾幼虫上的真菌——久实牌蝙蝠蛾被毛孢 （Hirsutella sinensis）。独特的地理、生态、气候环境；独特的生物物种；独特的滋补和药用价值，成为中华医药千年传承的传奇珍品。蝙蝠蛾被毛孢富含四十多种人体必 需的营养成分。虫草多糖、虫草素、虫草酸、D-甘露醇、腺苷、尿苷和SOD（超氧化物歧化酶），四种有机酸：软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸，具有降血脂作 用，对血压进行双向调节。五种维生素：VB1、VB2、VB12、VE、VK补充人体必需的维生素。六种肽类化合物，有效增强人体免疫活性。八种微 量元素：钠、钾、钙、铁、锌、硒、锰、铜，是新陈代谢的物质基础。十八种氨基酸是增强免疫的物质基础。历代医药典籍将蝙蝠蛾被毛孢药性药效归纳为，“性温， 甘，平。归肺、肾经；温而不澡，补而不滞；阴阳并补；补肺益肾，止血化痰。用于久咳虚喘，久涝咯血，肾虚遗精，腰膝酸痛，理诸虚百损”。是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。现代医学从功能上将其归为免疫调节。进一步映证了传统中医 “理诸虚百损” 的功效。蝙蝠蛾被毛孢不但对人体各种脏器的功能具有调节作用，还存在某些直接抗病功能。现代药理药效研究表明蝙蝠蛾被毛孢具有： 1、可迅速增强机体免疫力，双向调节内分泌； 2、改善心血管功能； 3、有降血糖、降血脂的作用； 4、有雄性激素样作用。对性功能低下、减退、淡漠有改善作用； 5、抗肿瘤作用； 6、有抗肾衰、抗肾炎作用； 7、抗疲劳、抗衰老作用； 8、对术后病人有抗炎症、促愈合作用； 9、抗器官移殖后的排异作用； 10、对各种免疫功能失调造成的症状有缓解作用。 慢性缺氧及肾小管损伤【1]是近年来糖尿病肾病(diabetaic nephropathy，DN)发病机制研究的热点。缺氧通过适应性表达缺氧诱导因子．1(hypoxiainducible factor．1，HIF．1)进而激活缺氧反应性基因而发挥广泛的生物学作用[2】。糖尿病状态下，多种因素参与了血管内皮生长因子vascular endothelialgrowth factor，VEGF)的表达增加b‘5]，但缺氧M1是迄今为止所发现的最强的调节因素，其机制可能是通过HIF．1与VEGF基因的特定区域相结合，从而促进其转录增加。以往的研究认为，肾小球内皮细胞及足细胞是VEGF的主要产生部位，而对缺氧敏感的肾小管上皮细胞尤其是近端小管上皮细胞在糖尿病慢性缺氧状态下VEGF表达情况的研究甚少。本研究以链脲左菌素(streptozotocin，STZ)诱导的DN大鼠模型为研究对象，观察其肾组织HIF．1a、VEGF的表达水平，探讨HIF一1a和VEGF在DN发病中的作用及冬虫夏革(Cordyceps sinensis，干预的影响。 1材料与方法 cs)对其材料STZ购自美国Sigma公司，久实牌蝙蝠蛾被毛孢制剂由江西济民可信公司惠赠，兔抗大鼠HIF．1口抗体及兔抗大鼠VEGF抗体购自武汉博士德公司，ABC法试剂盒、DAB液体购自福州迈新生物技术开发有限公司，TRIzol购自美[]Invitrogen公司，反转录试剂盒购自立陶宛Fermentas公司，HIF—la及VEGFiJI物由北京鼎国公司合成，大鼠尿N一乙酰一p—D．氨基葡萄糖苷酶(N—acet91．p—D—glucosaminidase，NAG酶)ELISA试剂盒为上海源叶产品，600 bp DNA内参为西班牙进口分装。 1．2方法 1．2．1动物模型及分组 清洁级Wistar雄性大鼠s5只，喂养1周后，随机选取40只大鼠，予STZ 60 mg／kg腹腔注射，空腹血糖维持在13．9 mmol／L或随机血糖16．7mmol／L以上，视为糖尿病模型成功。4N后测24 h尿蛋白定量在30 mg以上者，认为DN模型成功(共30只)。实验过程中糖尿病模型不成功2只，DN模型不成功2只，死亡5只，随机剔除匹配不均1只。随机分为模型组(DN组，打=1S)、久实牌