基英肽体对肿瘤细胞DNARNA和蛋白质合成的抑制作用.docVIP

基英肽体对肿瘤细胞DNA、RNA和蛋白质合成的抑制作用 摘要：本文应用放射性同位素前体参入法研究基英肽对人慢性髓性白血病细胞株K562,人早幼粒白血病细胞株HL－60，鼠×鼠杂交瘤细胞株E4B11C9和小鼠黑色素瘤细胞B16-F10的DNA、RNA和蛋白质合成作用的影响。结果表明：10－5000μg.ml-1的基英肽体外对四株肿瘤细胞的DNA.RNA的蛋白质合成均有不同程度的抑制作用，并存在明显的剂量依赖性和瘤株差异性。在大剂量时以对RNA的抑制作用最强。本实验为基英肽的抗肿瘤作用机制研究及临床应用提供了有益的实验依据。 关键词：基英肽；生物反应调节剂；抗肿瘤作用；同位素前体参入。 基英肽（Polyactin A,PAA）是我国研制的具有多种生物活性的生物反应调节剂。目前广泛应用于急慢性白血病、肺癌、食道癌等多种肿瘤的临床治疗，可提高近期疗效。本文应用同位素参入法对K562、HL－60、E4B11C9、B16-F10四株肿瘤细胞的DNA、RNA和蛋白质合成作用进行研究，旨在进一步探讨PAA的抗肿瘤作用机制。 【材料和方法】 1、瘤株：人慢性髓性白血病细胞株（human chronic myelogenous leukemia cell line,K562）,重庆医科大学病理教研室国外引进提供。人早幼粒白血病细胞株（human promyelocytic leukemia cell line,HL-60），中国医学科学院药物研究所提供。抗钩体017株外膜鼠×鼠杂交瘤细胞株(E4B11C9)，本校钩端螺旋体病研究室提供。B16-F10黑色素瘤：G57BL/6J小鼠体内诱导的具有高度肺转移的细胞亚株，四川抗菌素工业研究所提供。 2、药品与试剂：基英肽粉剂（8776－77）。RPMI-1640,日本Nissui制药株式会社产品，配制成含10％小牛血清，20nmol Hepes青霉素100u.ml-1,链霉素100μg.ml-1,1%谷氨酰胺，5×10－5mol二基乙醇的RPMI-1640液，用5％NaHCO3调整到PH为7.0－7.2备用。Hepes:英国Merck公司产品。NBCS(新生小牛血清)：成都华西生化制品厂产品，于56℃水浴中灭活30分钟，4℃冰箱保存备用。3H-TDR（比工为1.03TBq.mmol-1）,3H-UR(比度为0.796TBq.mmol-1),3H-Len (比度为2.4TBq.mmol-1)，均为中国科学院上海原子能研究所的产品。 3、靶细胞悬液制备：K562细胞、HL-60细胞体外培养呈悬浮生长，E4B11C9呈贴壁生长。取传代24小时的肿瘤细胞（细胞活力95％），用RPMI-1640液调配K562、HL-60、E4B11C9细胞悬液浓度分别为5×104.ml－1、1×105.ml-1。B16-F10黑色素瘤细胞的制备，无菌条件下取出瘤组织，制备单细胞悬液，浓度为5106.ml－1，细胞活力为95％。 4、3H-TdR，3H-UR和3H-Len参入测定：Kikuchi方法略加改进，于96孔培养板中加入上述调配好浓度的靶细胞悬液各100,实验组每孔加入10μl不同浓度的PAA药液，使其终浓度为1－5000μg.ml-1，对照组每孔加入100μlRPMI-1640液，每组均设3复孔，同时每孔加3H-TDR37KBq或3H-Leu55.5KBq,于37℃、5％的CO2培养箱中孵育18小时后，用DQY－Ⅲ型微量多头细胞样品收集器（绍兴玻璃医疗器械厂制造）将各孔细胞收集于玻纤滤纸上，用微量闪烁杯法于FJ－2105液体闪烁计数器上测定CPM，计算参入率。 用药组cpm值－本底cpm值 参入率＝ 对照组cpm值－本底cpm值 【结 果】 （一）基英肽对四株肿瘤细胞DNA合成的影响 Tab.1结果显示：基英肽对肿瘤细胞DNA合成的抑制作用存在着明显的瘤株差异性。其中对K562细胞作用最强，对B16-F10、E4B11C9作用次之，对HL-60作用则较弱。这种抑制作用和剂量相关，PAA浓度较高，抑制作用越明显。