奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌研究现状(综述).docVIP

新疆农业大学 专业文献综述 题 目: 奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的研究综 述 姓 名: 郭强强 学 院: 动物医学学院 专 业: 动物医学 班 级: 预防084班 学 号: 083631441 成 绩： 指导教师: 苏战强 职称: 讲师 2011年11月22日 新疆农业大学教务处制 奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的研究现状 　　　作者：郭强强　　　指导教师：苏战强 摘要：金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) ，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），是奶牛乳房炎的一种重要病原菌，可引起多种严重感染。有“嗜肉菌的别称，金黄色葡萄球菌是乳房炎感染常见的病原菌之一。其引起的奶牛乳房炎给奶牛养殖业造成了极大的经济损失,尽管牛场环境、挤奶操作和奶牛干奶期治疗等方面有了很大改善,金葡菌引起的乳房炎仍然被国内外牛场视为一种难以防治的疾病。　　 关键词：生物学特性、致病性、检验、分子生物学 一、生物学特性 　 三、检验 （1）PCR方法检验 采用的研究、试验方法和技术路线（包括工艺流程） 提取各个标准菌株 的基因组DNA ↓ 采用标准金黄色葡萄球菌菌株 对设定引物的PCR反应条件 进行选择和优化 ↓ 用表皮葡萄球菌、 木糖葡萄球菌、 甲型溶血性链球菌、 乙型溶血性链球菌、 蜡样芽胞杆菌作对照 进行PCR扩增 检测引物对 金黄色葡萄球菌特异性 ↓ ↓——————————↓ ↓ ↓ 采用标准金黄色葡萄球菌菌株 采用生理生化的方法 探寻从乳样品中直接获取 乳中金黄色葡萄球菌分离 ↓ ↓ ↓ 用设计引物进行PCR扩增 ↓ 检测引物对乳中分离出的金黄色葡萄球菌 ↓ 不同菌株的普遍适用性 ↓ ↓ ↓--------------------------↓ ↓ 根据已总结出的从乳样品中直接获取金黄色葡萄球菌DNA模板的方法， 对从乳中分离出的金黄色葡萄球菌各个菌株分别处理获取模板， 进行PCR扩增,检测引物对金黄色葡萄球菌不同菌株的灵敏度 (2)Elisa方法检测 金黄色葡萄球菌肠毒素ELISA检测试剂盒 操作步骤 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。 8 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。 9 在450nm波长处测定各孔的OD值。 一般检验方法： 　　金黄色葡萄球菌的检验 　　样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10-1稀释液。 　　增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°C培养24小时。 　　分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线