TE70-TE77简易操作指南.doc

TE70 / TE77 简易操作指南 重要信息 ? 转移装置的电子元件应保持干燥。使用前后，仅用蒸馏水清洗电极（不清洗 香蕉塞）。 ? 使用足够的用缓冲液浸泡的印迹纸在膜/凝胶叠层的两侧，使得在转移过程中 缓冲液不被耗尽。 ? 应根据生产厂商的说明操作仪器。 ? 只有 Amersham Biosciences 认可或提供的附件或零件可以用于操作，维护 该仪器。 操作指导 转移蛋白，准备装置，组装叠层和连接电源。然后按照所需时间进行转移，操作 步骤如下。 组装转移叠层 用蒸馏水清洗电极。 凝胶的准备 除去上样孔和浓缩胶部分。在缓冲液中平衡。 3．制备转移叠层 剪裁印迹纸和转移膜，应与胶体同等尺寸。小心叠放每层，对齐。如果膜需要比 胶更大，使用聚脂薄膜面罩（见以下可选步骤）以保证没有电流绕过胶。 可选步骤：剪裁聚脂薄膜面罩到所需大小。测量凝胶大小。面罩中间开口，大约 小于凝胶 2mm。将面罩放置在装置底部，开口居中。 准备印迹纸 每个胶，至少剪裁 6 张与胶差不多同等大小的印迹纸。 根据所需缓冲液的用量测量印迹纸层的厚度和数目。300ml 以上的缓冲液可用于 大一点的胶或者 60 分钟的转移，而不使叠层过分干燥或者缓冲液耗尽。 用转移缓冲液浸泡至少 3 张印迹纸。一张张放于下电极，除气泡。 5．准备膜 推荐使用 Hybond 膜。 对于每个胶，剪裁 1 个与胶同等大小或稍小一点的膜。 用蒸馏水提前润湿硝化纤维膜或者尼龙膜。用甲醇提前润湿 PVDF 或者其他疏水 膜。然后将膜浸润在转移缓冲液中 2-5 分钟。 完成叠层 a）将预先润湿的膜放置在印迹纸上。 b) 将胶放置在膜上。注意：蛋白质会在接触时便开始转移，所以一次性将膜放 置在合适位置是很重要的。  c) 用浸润过的三层印迹纸覆盖在胶上。 提醒！小心放置叠层，使之边缘互相平行。每加入一层，用干净的移液管轻轻按 压挤出气泡，可加入几滴缓冲液帮助清除气泡。 多块胶：可将同等厚度的胶层并排叠放或者两个三明治层摞在一起。 为了得到更好的结果，转移叠层应该被放置在电极面板中心。 如果两个胶叠放，可在中间用多孔玻璃纸隔开-不是塑料！（玻璃纸可以允许电流 通过而阻挡蛋白质分子）。将玻璃纸剪裁成比胶体稍小的尺寸，然后用缓冲液润 湿。 在最上层放置罩子。直到转移结束，才能去掉罩子以避免叠层移动。 提示：当转移多块胶时，转移效率取决于如下因素，胶体的厚度，胶体位置，转 移缓冲液，膜的类型，以及最重要的，蛋白质的特性。通常情况下，胶越靠近电 极转移越完全。相比摞在一起，并排放置更为常用。  电转移 TE 70 和 TE 77 1．关闭电源，电流和电压归零 连接转移装置和电源，红对红，黑对黑。 设置电流 最大电流设置不应超过 0.8mA/cm2 。如果转移多块胶，需要增长转移时间。使 用下面的图表可计算得到所需的电流设置，或者计算胶的面积，再乘以 mA/cm2 。 电源定时  大多数转移可在 1 个小时内完成，但是多余蛋白大分子，非变性胶上的蛋白质， 和较厚的胶可能需要更长时间。最佳的转移时间需要根据经验来确定。 TE70PWR 和 TE 77 PWR 按下 power 键打开设备。设置电流电压值然后开始转移。在转移过程中，可显示 电压，不可在恒定电压下进行转移。 DISPLAY MODE BUTTON可在电流（mA），时间（hour:minutes）和电压（V） 间变换。 Up 和 Down 按钮可调节电流和时间的值。 按下 START/STOP 按钮开始转移。 转移过程中 TE70PWR 和 TE 77 PWR 电压启动时，二极管（LED）会亮红光。 时间和电流可以在转移过程中改动。使用显示模式键来选择时间和电流。Up 和 Down 按钮可调节电流和时间的值。当数值改变时，LED 会闪动。大约 10 秒后， 停止闪动，会显示实时参数。 缓冲液耗尽 一个比较常见导致失败的因素是缓冲液的耗尽。缓冲液的耗尽可能导致 pH 值的 变动和过热，进而使转移失败。  TE70PWR 和 TE 77 PWR 可监控转移叠层的电阻。电阻变化过大，则表明缓冲液 系统可能耗尽。设备会阻止转移。如果这种情况发生，会显示信息“Dry（干燥）” 然后设备将中止转移。停止后可加入更多缓冲液然后继续设备运行。 转移完成后 TE70 和 TE77 关闭电源，拔掉导线。 TE70 PWR 和 TE77PWR 转移接受后，设备会示警 5 秒钟。LED 将闪动并在电流，时间和电压值之间循 环。按任意键可清除显示。 1．小心去掉罩子。 2．去掉并扔掉上层印迹纸 3．取下胶。 4．比较膜与胶接触的一面。 5．取下膜，使之风干并保存。 6．去掉并扔掉剩下的印迹纸。 7．清洗设备。 电转移的注意事项 ? 电泳后迅速进行转移，