气相色谱法测定药物中有机溶剂残留量R7111012.docVIP

气相色谱法检测溶液中正己烷 一 实验要求 1、掌握内标法、外标法计算杂质含量。 2、熟悉气相色谱-氢火焰离子化检测器法（GC-FID）测定原料药中残留有机溶剂的方法。 3、熟悉气相色谱仪的工作原理和操作方法。 二 实验指导要点: 1. 气相色谱仪的工作原理，填充柱、毛细管柱的性能（固定相极性，最高使用温度，色谱柱长、内径大小，固定液涂渍百分含量等）介绍。 2. 通气、开、关机顺序，气路密封性检查（开机加热前用洗洁精水稀释液或中性肥皂水检漏。必要时进行此项检查。），升温预热仪器。 3. 气化室、柱温、检测室温度设定和载气、氢气、空气流速控制的一般要求。 4. 色谱软件使用介绍。 5. 待基线稳定，进样分析。进针和拔针速度要求快而果断，并留针一定时间，每次进、拔针速度、留针时间应保持一致（示范）。 6. 记录样品名，色谱图文件号，保留时间，峰面积（或峰高）。 7. 按要求计算柱效、分离度、拖尾因子和重复性。 8. 校正因子计算，内标法、外标法计算杂质含量。 9. 药品或其制剂在该色谱条件下不出峰，若样品无法获得，可准备一个含一定量（根据限量要求）丙酮的水溶液作为样品液，供学生实验用。 三 主要仪器与药品 气相色谱仪，弱极性或中等极性气相色谱柱，1～5μL微量注射器；乙酸乙酯乙酸丁酯。 四 实验流程和步骤（含操作要点） 1、色谱条件 色谱柱：TM-plot Q毛细管柱，柱长15 m，内径0.53 mm。检测器：FID。柱温：140℃，气化室温度：200℃，检测器温度：250℃，载气：氮气，空气：0.15 MPa，H2:0.1MPa，进样：0. μL。 2、溶液制备与测定 精密量取适量，置10mL量瓶中，精密加乙酸乙酯（内标物质）溶液5 mL，加稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另取量取适量，置10mL量瓶中，精密加入上述内标溶液5 mL，加溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取上述溶液，按照气相色谱法，按计算的理论板数应大于700。 3、计算 按下式计算定量校正因子（f）和样品中(BA)的含量（g/ml）： 内标为乙酸乙酯（EA），定量方法采用峰高。 已知标准品溶液中BA的浓度为0.25×10-3g/ml，请用内标法求样品中BA的浓度。 内标物EA在标准品和样品中的浓度相同，配置过程相同。 A 为峰面积，G为浓度含量（g/ml）。 五 注意事项 人身安全，仪器安全； 器皿和药品轻拿轻放，如不清楚使用方法，可以请教老师； 实验结束后打扫实验台面和地面。 关于气相色谱仪器的注意事项： 1、色谱柱的使用温度——各种固定相均有最高使用温度的限制，为延长色谱柱的使用寿命，在分离度达到要求的情况下尽可能选择低的柱温。开机时，要先通载气，再升高气化室、检测室温度和分析柱温度，为使检测室温度始终高于分析柱温度，可先加热检测室，待检测室温度升至近设定温度时再升高分析柱温度；关机前须先降温，待柱温降至50℃以下时，才可停止通载气、关机。 2、进样操作——为获得较好的精密度和色谱峰形状，进样时速度要快而果断，并且每次进样速度、留针时间应保持一致。 3、检测器的使用——为避免被测物冷凝在检测器上而污染检测器，检测器的温度必须高于柱温30℃，并不得低于100℃。FID点火时应关小空气流量和开大H2流量，待点燃后，慢慢调整到工作比例。用峰高定量时，需保持载气流速恒定。 六 作业和思考题 利用气相色谱法的结果测定，使用内标法计算样品中有机溶剂残留的浓度。 七 附录 1、对仪器的一般要求 通常所用载气为氮气；色谱柱为填充柱或毛细管柱，常用玻璃或弹性石英毛细管柱的内径为0.20 mm或0.32 mm。进样口温度应高于柱温30～50 ℃；进样量一般不超过数微升；柱径越细进样量应越少。检测器为氢火焰离子化检测器，检测温度一般高于柱温，并不得低于100 ℃，以避免水汽凝结，通常为250～350 ℃。 药典各品种项下规定的条件，除检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱柱材料不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并符合系统适用性试验的要求。一般色谱图约于30分钟内记录完毕。 2、系统适用性试验 试验目的：用规定的对照品对仪器进行试验和调整，分析测试色谱柱的理论板数、分离度、重复性和拖尾因子，以达到规定的要求，保证分析的精确性。 测试内容与方法： (1)、色谱柱的理论板数（n）:在选定的条件下，注入各品种项下规定的供试品溶液或内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间（tR）和半峰高宽（Wh/2），按n=5.54(tR/Wh/2)2计算色谱柱的理论板数。如果测得理论板数低于规定的理论板数，