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电镜标本制作原理及方法 一、相关理论 A1 型 1． 透射电镜最大放大倍数是： A 1000倍 B 2000倍 C 5万倍 D 100万倍 E 50万倍 答：C 易 X 型 2. 透射电镜取材应注意 A 动作快捷 B 组织体积小（1mm×1mm×1mm） C 固定迅速 D 组织损伤小 E 冷环境下操作（0-4℃） 答案：ABCDE 中 二、专业知识 A1 型 3. 透射电镜标本超薄，切片厚为： A 1mm B 1μm C 0.5μm D 0.3μm E 0.1μm 答案：E 中 X型 4. 透射电镜标本常用固定液是： A 多聚甲醛 B 戊二醛 C 锇酸 D 丙酮 E 乙醇 答案：BC 易 三、实践能力 A2 型 5. 透射电镜标本制备超薄切片最常用的包埋剂是： A 火棉胶 B 蜜蜡 C 石蜡 D 明胶 E 环氧树脂答案：E 中 A3 型 6. 透射电镜超薄切片技术如同石蜡切片都需要切片支撑物，所不同是石蜡切片的支撑物为载玻片，超薄切片为载网，在其上覆盖支持膜 问题1 超薄切片载网最常用的是： A 铁网 B 钢网 C 锡网 D 铜网 E 银网 答案：D 难 问题2 最常用的支持膜有： A 环氧树脂膜 B 明胶 C 火棉胶膜 D 甲基丙烯酸甲酯膜 E 甲基丙烯酸乙二醇膜 答案：C 难 问题3 载网上覆盖支持膜的厚度要求是： A 4-7μm B 10-20μm C 0.2-0.5μm D 30-50nm E 60nm 答案：B 难 A4型 7.透射电镜的样品制备方法，超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制备流程与石蜡切片相似，需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋、切片、染色等步骤。 问题1 透射电镜的样品要求 A 新鲜标本组织 B 陈旧标本组织 C 石蜡标本块 D 腐败标本 E 冷冻标本 答案：A 易 问题2 对动物组织，如脑、动脉、脊髓等最好采用的固定方法为： A 浸泡法 B 蒸汽固定法 C 微波固定法 D 冷固定法 E 灌流固定法 答案：E 难 问题3 超薄切片技术通常采用双固定法，称谓前固定和后固定，后固定液为： A 甲醛 B 甲醇 C 乙醇 D 锇酸 E 戊二醛 答案：D 中 问题4 如当时不能完成浸透、包埋步骤时，标本应保存在 A 50%脱水剂中 B 60%脱水剂中 C 70%脱水剂中 D 95%脱水剂中 E 100%脱水剂中 答案：C 难 X 型 8. 超薄切片，为了保证包埋介质完全渗入组织内部，必须将组织内水分驱除干净，最常用的脱水剂是乙醇和丙酮，为防止细胞收缩变形，梯度脱水步骤应为： A 50%乙醇或丙酮 B 70%乙醇或丙酮 C 80%乙醇或丙酮 D 90%乙醇或丙酮 E 100%乙醇或丙酮（二次） 答案：ABCDE 易 9.脱水操作中应注意的问题 A 脱水要彻底 B 脱水剂要纯 C 脱水剂中可加吸水剂 （如无水硫酸铜） D 更换脱水步骤时，动作要迅速 E 避免样品干燥出现气泡 答案：ABCDE 中 10. 超薄切片常用的染色剂 是： A 巴氏染色 B 苏木素染色 C 醋酸铀 D 硝酸银 E 柠檬酸铅 答案：CE 中 多项问题 11. 透射电镜标本制备中，浸透就是利用包埋剂渗入到组织内部取代脱水剂，这种包埋剂在单体状态时为液体，能渗入组织内，当加入某些催化剂，经加温骤合成固定，便于超薄切片。 问题1 理想的包埋剂应具有什么特点： A 粘度低，容易渗入组织 B 骤合均匀而充分，骤合前后体积变化小 C 具有良好的切割性 D 能耐受电子轰击，高温下不变形 E 对细胞成份抽提少，微细结构保存良好 F 电镜的高倍放大下，本身不显示任何结构 G 材料来源丰富，易得，价格低廉，对人体无害 答案：ABCDFG 难 问题2 常用环氧树脂包埋剂的性质 A 环氧树脂是一类高分子骤合物 B 分子中含有两种反应基团，即环氧基和羟基 C 加入酸酐类时，树脂分子中的羟基能与酸酐结合 D 形成分子间横桥连接 E 横桥式连接作用的交联剂叫做硬化剂 F 硬化剂有十二烷基琥珀酸酐（DDSA） G 环氧树脂包埋剂骤合前后体积变化小 H 耐电子束轰击 答案：ABCDEFGH 难 问题3 包埋操作中，应注意什么 A 所有试剂要防潮，保存干燥瓶中 B 所有器具要烘干 C 试剂要搅拌均匀，不能有气泡 D 动作轻巧 E 骤合时温度要控制适宜 F 盛放包埋剂的器具及时用丙酮清洗干净 G 皮肤不接触包埋剂 答案： ABCDEFG 中 12. 超薄切片是透射电镜样品制备流程中，关键步骤之一，必须把标本切成厚度小于0.1μm以下的薄片才适用，常用超薄切片厚度是50nm。 问题1 超薄切片前的准备工作 A 手