VFA测定操作规程比色法.docVIP

VFA分析原理 含挥发性脂肪酸的样液，在加热的条件下，与酸性乙二醇作用生成酯，此酯与羧胺反应，形成氧肟酸。在高铁试剂存在下，氧肟酸转化为高铁氧肟酸的棕红色络合物，其颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物——挥发性脂肪酸的含量成正比，故可用比色法测定。 药品 1：1硫酸浓硫酸（相对密度1.84，C.P.）加到同体积蒸馏水中稀释配制。 4.5mol/L的氢氧化钠称取180g氢氧化钠(C.P.)溶于水中，冷后以蒸馏水稀释至1L 10%硫酸羟胺溶液称取硫酸羟胺(C.P.)10.0g，溶于100mL蒸馏水中。 酸性氯化铁试剂将20.0g分析纯FeCl3 ·6H2O溶于500mL水中，准确加入20.0 mL浓硫酸并以蒸馏水稀释至1L。测定步骤乙酸标准液的配制精确称取乙酸（分析纯，相对密度1.045，含量99.0%）1.010g，以蒸馏水稀释至100mL，此溶液含乙酸10mg/mL。 准确吸取10 mg/mL乙酸标准溶液1.0mL、5.0mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL、25.0mL、30.0mL，分别置于100.0mL容量瓶内，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得100/L、500 /L、1000 /L、1500 /L、2000 /L、2500 /L、3000 /L的乙酸标准系列液分别吸取0.5 mL分置于中（12.5cm×1.5cm），每中准确加入1.5mL二醇和0.2mL稀硫酸，于沸水浴中加热3min，然后立即以冷水冷却；再加入0.5mL硫酸羟胺和2.0mL4.5mol/L的氢氧化钠，充分摇匀，放置1min，然后10mL酸性氯化铁用蒸馏水定容，并充分摇匀，静置5min，用分光光度计以500nm波长测定光密度，以坐标表示浓度值，坐标表示光密度值。 此方法是挥发性脂肪酸总量的经验测定法，比蒸馏法测定更为简便、快速。除150mg/L以下的低浓度范围外，其测定值相对误差与气相色谱法测定总值的相对误差相近。 此法中的反应是在严格的pH值条件下进行的，最适pH值为1.6±0.1。pH值高于2.0时，色度加剧，pH值低于1.0时，颜色难以稳定，易消失。 如果所做的空白测定含量酸量超过200mg/L时必须用氢氧化钠蒸馏提纯己二醇 。 酸性氯化铁配制好后，应静置过夜，弃去沉淀。 必须严格遵守操作规程，显色反应必须充分摇动。 比色法没挥发性脂肪酸总量，方便快速，对于特定样品（特别是污水污泥体系）的准确度较高，适合于沼气发酵的常规分析。 3