液相层析质谱仪的基质效应与因应之道.PDFVIP

中華民國九十六年第六十五卷第二期 CHEMISTRY (The Chinese Chemical Society, Taipei) June 2007, Vol. 65, No. 2, pp.151-155 151 專題報導 液相層析 質譜儀的基質效應與因應之道 / 陳家揚 國立臺灣大學 環境衛生研究所 摘要：樣本中的基質成分可能改變游離源離子化的效率，尤其是抑制離子的形成，造成偵測靈敏度的下 降，以及影響分析的準確度與精密度。由於質譜儀，特別是串連式質譜儀，具有高靈敏度和高選擇性， 加以造成干擾的基質常常未被離子化而未出現於質譜圖，往往造成分析者對於基質效應的忽略。本文簡 介基質效應對於定量的影響，如何加以評估，並探討各種常用來降低或移除基質效應的方法其優缺點和 適用性。 關鍵字：基質效應、離子抑制、電灑游離、大氣壓化學游離、同位素稀釋技術。 隨著游離源（ion source ）技術的進展，近年來液 時間進入質譜儀的其他物質，尤其是一些揮發性較低 相層析/質譜儀（LC/MS ）或液相層析串連式質譜儀 的分子，造成待測物（analyte ）於上述游離源中離子 （LC/MS/MS ）的應用日漸廣泛。因為質譜儀係偵測 化效率不預期地產生變動，進而影響定量的結果2 ；大 分子離子化之後的質荷比（m/z ratio ），因此無法形成 多數情形以游離化被抑制（ion suppression ）為多，少 離子或是任何會干擾離子形成的因素，乃成為質譜儀 數情形會增強游離化的效率（enhancement ）。基質效 的罩門。由於 MS/MS 優異的專一性，起初許多使用 應主要改變液相化學過程，例如競爭電荷或質子、改 者認為樣本不需要太多的樣本前處理，配合短的液相 變液滴分散、降低待測物分佈至液滴表面等2 ，因此ESI 層析管柱稍做分離即可。但是自從 1996 年 Buhrmann 所受到的影響通常遠大於 APCI3,4 。許多造成基質效應 等人 1 發現不同的樣本前處理方式會影響 LC/MS/MS 的分子未必會形成離子，所以欲鑑定何種基質成分造 定量的準確度和精密度，而且是起因於電灑游離 成影響並非易事。再者，基質效應通常隨著待測物與 （electrospray ionization, ESI ）的離子化受到抑制，基 基質的不同而變，甚至同類型的樣本其基質效應也未 質效應（matrix effect ）的問題開始逐漸受到重視。 必相同。例如 Matuszewski 等人的研究指出，同一批 次的血漿樣本，分析的再現性為可接受之範圍，但是 何謂基質效應與其評估方式 將五個不同批次的血清樣本一併觀察時，則分析變異 大幅增加5 。 目前小分子於 LC/MS(/MS)的分析，大部分利用 欲評估基質效應，目前較常見用有兩種方式。第 電灑游離將其離子化，其次為使用大氣壓化學游離 一種為管柱後灌流（post-column infusion ），便於評估 （atmospheric pressure chemical ionization, APCI ）。 ESI 不同之樣本前處理所產生之基質效應 2,6 ：於液相層析 游離源類似一個液相的電化學反應槽，藉由高速氣體 管柱流析後利用 T 型接頭（Tee ）連接另一注射器 以及施以高電壓的幫助下，將層析動相（mobile phase ） （syringe pump ），連續注射待測物，並將基質萃取物 霧化為小液滴；小液滴經由電荷集中互斥進一步分散 打入液相層析管柱，可觀察不同層析時間點待測物訊 縮小，逐步氣化。APCI 則先以霧化氣體（nebulizer gas ） 號變化。若於待測物之滯留時間（retention time ）附近 使層析動相形成小液滴之後，再以加熱方式揮發，並 訊號下降，表示基