细胞培养基本技术一2013-11.ppt

教学对象及目的： 教学对象包括各科的研究生，教学任务由动脉硬化研究所承担。 教学目的：通过学习，使大家了解细胞培养的基本知识，掌握细胞培养基本的操作技术及观察、检测方法，为今后进一步学习及科研奠定基础。 教 学 要 求： 本课程以实验操作为主。学员学习时应在了解基本知识的基础上，认真地按要求进行实际操作，以熟练掌握各项实验操作技术的原则和要领。 目 录 一、细胞培养的基本知识 二、细胞培养的实验用品及用途 三、各种实验用品的清洗与消毒 四、各种液体的配制方法 五、细胞培养的应用范围 六、常用术语及解释 七、体外培养细胞的优缺点 一、细胞培养的基本知识 组织细胞培养概念 细胞培养技术是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。习惯上泛指所有的体外培养，即器官培养，组织培养，和细胞培养的总称。 即： 在无菌条件下,从动物(植物也可)或在人体中取出组织或细胞,置于模拟体内的生理环境中(无菌,适当的温度和一定的营养条件)使之生存和增殖生长的技术方法。 用于研究细胞、组织的代谢、增殖、分化、形态和功能变化，各种理化因子对活细胞的影响。 细胞培养可分为群体培养和克隆培养 群体培养（mass culture）：即将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。 克隆培养（clone culture）：即将少数细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。 群体培养（左）和克隆培养（右） 细胞培养工作者的要求 一、掌握操作技术的同时，尚需明白各种操作的基本原理。 二、要有判定细胞生长好坏和是否发生污染的能力； 三、要熟悉体外培养细胞的生存条件、细胞的生物学性状及与此有关的基本理论知识。 体外培养细胞的生物学特点 1、体外细胞的分化特点 2、体外培养细胞的分型 3、组织培养细胞的生长和增殖过程 1、体外细胞的分化特点 在个体发育过程中，子代细胞产生形态、结构和功能差异的过程称为细胞分化。 由于失去了神经、激素等体液的调节和细胞间相互影响，经多次传代增殖，久之则发生如下变化： 分化现象逐渐减弱或不显，形态与功能趋于单一化，或传一定代数后衰老死亡； 发生转化，获不死性而成为能无限传代的连续细胞系或恶性细胞系。 2、体外培养细胞的分型 上皮细胞型 贴壁型细胞 成纤维细胞型 游走细胞型 悬浮型细胞 贴壁(粘附)型细胞 附着于底物(支持物)表面生长的细胞，主要讨论本型细胞的培养。活体体内的细胞当离体培养时大多数均以贴附型方式生长。 必须贴附于底物才能生长的细胞称为贴附(锚着)依赖性细胞。 体外培养时：组织细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。 目前已有很多种细胞能在体外培养生长，包括正常细胞和肿瘤细胞。例如：成纤维细胞、骨骼组织(骨及软骨)、心肌与平滑肌、肝、肺、肾、乳腺、皮胺、神经胶质细胞、内分泌细胞、黑色素细胞及各种肿瘤细胞等。    细胞在体内、外的粘附方式： (存在差异) 体内：粘附是全方位。 外形具有复杂的立体特征。 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面。  外形一般与体内时明显不同. 1.上皮样细胞型 仅形态上似体内，实际上不完全等于体内同名的细胞。 来源：来源于外胚层，内胚层细胞 如：皮肤及其衍生物 消化道，乳腺，肺泡 上皮性肿瘤 形态：类似体内的上皮细胞。扁平，不规则多角形，中有圆形核。培养中的上皮细胞形态为扁平的多角形，其生长特点为细胞之间紧密相靠、互相衔接，呈“铺路石”状，具有连接成片的能力。 生长特点： 易相连成片 相靠—紧密相连—成薄层—铺路石状 生长时呈膜状移动 很少脱离细胞群而单个活动 2.成纤维细胞样细胞 名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的细胞 来源：由中胚层间质组织起源的组织 如：真正的成纤维细胞 心肌，平滑肌，成骨细胞 形态：似体内成纤维细胞的形态 胞体梭形或不规则三角形 胞质向外伸出2—3个长短不等的突起 中有卵圆形核 生长特点 排列成放射状，漩涡状 并不紧靠连成片， 细胞—细胞接触易断开而单独行动 游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起 贴附生长细胞的特点 1. 与体内同名的细胞不完全相同 如：形态相似的成纤维细胞，可不同