第六章 动植物细胞培养反应器.ppt

第六章 动、植物细胞培养反应器 第一节 植物细胞（组织）培养反应器 地球上75%的人口以植物作为治病、防病的药物来源。但是由于人类对天然植物药资源的掠夺性开发，使得天然资源已经枯竭。80年代末期植物细胞培养技术的兴起为缓和矛盾、生产更多的有用代谢产物提供了方法和机会，开辟了植物资源合理利用的新途径。 一、植物培养过程的特点 虽然微生物培养中的许多技术可用于植物细胞培养，但由于植物细胞本身固有的特性，要建立一套适合于植物细胞培养的技术和装置，必须要了解植物细胞的有关性质。 1、植物细胞形态 植物细胞要比微生物细胞大得多，在培养过程中，细胞形态及大小有明显的变化，并会有聚集成块的情况出现。在生长停止后，细胞形态随之变化并出现块状细胞游离分散的现象。 2、植物细胞培养液的粘度和微生物发酵液表现出明显的不同，一般属于非牛顿型流体。培养过程中粘度变化相当之大。 3、植物细胞培养的需氧量要比微生物发酵的需氧量低得多。过高的氧传递效率，会导致细胞浓度的降低。在k La值高的操作条件下，通入一定量的CO2对细胞量的增大是有效的。 4、植物细胞对剪切力比微生物细胞敏感。 二、植物细胞培养反应器 植物细胞培养主要采用悬浮培养和固定化细胞培养系统。 悬浮培养所用生物反应器主要有机械搅拌反应器和非机械搅拌反应器。 固定化细胞培养反应器有填充床反应器、流化床反应器和膜反应器等类型。 1、悬浮培养生物反应器 （1）机械搅拌式反应器 机械搅拌式反应器采用机械搅拌器使溶质均匀混合，其主要优点是能获得较高的kLa值。而其存在的主要问题是植物细胞的细胞壁对剪切的耐受力差。 单就剪切对细胞造成伤害、抑制植物细胞生长和次级代谢物合成而言，对搅拌器加以改进，可以减少搅拌过程中的剪切力，从而使搅拌式反应器能更广泛地用于植物细胞培养。 另外，通过对细胞在搅拌式反应器上的长期驯化，细胞对剪切力的耐受程度也大大提高。 由于机械搅拌反应器单位体积消耗的功率较高，反应器的搅拌轴也给无菌密封带来困难，反应器内的搅拌装置也给器内增加了死角，尽管机械搅拌反应器已成功用于植物细胞培养，但如何更好地应用于次级代谢产物的生产还需更深入的研究。 （2）非机械搅拌式反应器 通常为气体搅拌式反应器，是一种利用通入的空气来搅拌的反应器，主要有鼓泡式和 气升式（外循环和内循环） 植物细胞培养属于低、中需氧系统，气体搅拌通常比机械搅拌更为有效。气体搅拌反应器因没有搅拌装置而易保持无菌。也因其结构简单、传氧效率高以及剪切力低而更适合植物细胞培养。 因搅拌强度低，使培养物混合不均，必须依靠大量通气输入动量和能量，以保证反应器内培养液的良好传质、传热。过量的通气，也易于驱除培养液中的CO2和乙烯，对细胞生长反而有阻碍作用；过高的溶氧也对植物细胞合成次级代谢产物不利。 2、固定化细胞生物反应器 固定化细胞培养可以在一定程度上防止培养过程中高产细胞系出现低产率和生成其他代谢物的情况发生； 固定化细胞包埋在支持物内，可以消除或极大地减弱流质流动引起的切变力； 细胞在一定限定范围内生长也可以导致一定程度的分化发育，从而促进次级代谢产物的产生； 便于进行连续化操作； 固定化细胞反应器的类型： （1）填充床反应器 细胞固定于支持物表面或内部，支持物颗粒堆叠成床，培养基在床层间流动。 填充床中单位体积细胞较多，由于混合效果不好常使床内氧的传递、气体的排除、温度和pH控制困难。如支持物颗粒破碎还易堵塞填充床。 （2）流化床反应器 利用流体的能量使支持物颗粒处于悬浮状态。 该反应器混合效果较好，但流体的切变力和固定化细胞的碰撞常使支持物颗粒破损。另外，流体动力学复杂使其放大困难。 （3）膜反应器 采用具有一定孔径和选择性的膜固定植物细胞。营养物质可以通过膜渗透到细胞中，细胞产生的次级代谢产物通过膜释放到培养液中。 3、植物细胞培养反应器的放大 一般认为，植物细胞培养反应器的放大过程可以以相同体积氧传递系数为依据。同时考虑合理的搅拌强度。整个反应器放大过程需要在充分了解大型反应器内流体流动、传热、传质规律上进行。 三、植物组织培养反应器 研究表明，植物次级代谢产物的合成常与植物细胞的分化程度有关。因此，可利用高度分化的植物器官、组织来培养以提高目的产物含量。 在组织培养研究中，大规模培养系统发展较为突出的领域主要有以下几种： 1、发状根大规模培养 由发根脓杆菌感染双子叶植物形成的发状根