Survivin-siRNA在体外诱导Panc-1细胞凋亡的实验研究.docVIP

Survivin-siRNA在体外诱导Panc-1细胞凋亡的实验研究 作者：邱文洪 郭凯文 宋文剑 沈关心 【摘要】 探讨RNA干扰技术抑制Survivin对人胰癌细胞株Panc-1细胞凋亡的影响。方法： 体外设计、合成针对survivin基因的小分子干扰RNA(survivin-siRNA)，应用脂质体介导survivin-siRNA转染Panc-1细胞后，MTT试验测定转染细胞的增殖抑制率，RT-PCR检测细胞survivin mRNA表达，琼脂糖凝胶电泳分析其对Panc-1细胞凋亡诱导作用。结果： 转染survivin-siRNA的Panc-1细胞增殖明显受抑制，与对照进行比较，具有显著性差异（P0.01）；经琼脂糖凝胶电泳，转染survivin-siRNA的Panc-1细胞可见到DNA梯形条带，而对照细胞未见到。结论：survivin-siRNA能够显著诱导Panc-1细胞凋亡。 【关键词】 siRNA survivin Panc-1 凋亡 　　The Study of siRNA of Survivin Gene Induced Apoptosis in Panc-1 Cell Line in Vitro Qiu Wenhong，et al(Department of Immunology, College of Medicine, Jianghan University, Wuhan 430056)Abstract Objective： To explore the effects of surviving-siRNA on induced apoptosis in human pancreatic cancer cell line Panc-1. Methods: The small interference RNA （siRNA） targeting survivin gene was designed and synthesized by transcription in vitro. Survivin siRNA was transferred into Panc-1 cell line by lipofection. The opposite livability on Panc-1 cell line was assayed with MTT test. Expression of survivin was detected by RT-PCR. Apoptosis was detected by DNA gel electrophoresis. Results: Survivin siRNA obviously inhibited the Panc-1 cells growth (P0.01). Agarose gel electrophoresis of genomic DNA from Survivin siRNA transferred Panc-1 cells showed typical DNA ladder, but DNA from other cells did not. Conclusion: Survivin siRNA could effectively induce apoptosis in Panc-1 cells. 　　Key words siRNA ；Survivin; Panc-1 cell line； Apoptosis 生存素（Survivin）是凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisprotEin,IAP)家族新成员。它作为一种新的凋亡抑制因子，其组织分布和作用机制的独特性已引起国外学者的广泛关注［1］。深入研究RNA干扰技术的作用将为人胰腺癌的基因 治疗 提供一种较有效的方法。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 Panc-1细胞本室保存；脂质体LipfectamineTM2000购自Invitrogen公司；MTT(噻唑蓝)购自SantaCruz公司；Taq DNA聚合酶，逆转录试剂盒购自MBI公司；RPMI1640培养基，TRIzol RNA分离试剂盒购自GIBCO公司；细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒购自Beytime Biotechnology公司。 　　1.2 设计survivin特异性siRNA 根据survivin基因在GenBank中的序列，应用美国Ambion公司的设计软件设计相应的siRNA，同时在GenBank表达序列标签(EST)数据库中用BLAST检索，确认所设计siRNA序列的唯一性，人工合成针对740～761nt位碱基靶序列的两条寡核苷酸链模板。 　　1.3 合成survivin特