小麦黄花叶病毒的分离提纯及其血清学等特性.PDF

维普资讯 囊+11擎枭意 2。l¨6 1g3 Vizo]egL=l $|ilea 小麦黄花叶病毒的分离提纯及其血清学等特性 陈剑平 阮义理 (浙江省在业科学院崧毒实验室，杭州，~10021) 提 要 应用梯度离 心和超速离心浓缩获得部分提纯的病毒翩剂， 产 量 约为 7．45g／kg寿 叶 。 提纯的病毒制剂的紫外吸收曲线呈典型的核蛋白暖收曲线。OD260]OD242和 OD260／OD 280的此值分别为1．24和 1．38。病毒粒 子呈线状，宽 13-- 14nm，长度 主要分布于 250-- 300．m和550--700nm之 间，Z000nm以上 的粒子也有检刊。寿毒外壳蛋白仅由一十分 子量 约为 30Ktl的亚基组成。在免疫电镜试验 中 病毒粒子与 日本W,~MV抗血清发生强烈的血 清学匣应。新鲜病叶的超薄切片 中可看到大量风轱体 和膜状律。 关■髑：小麦黄花叶病毒 (WYMV) 提纯 外亮蛋自 免疫 电镜 自七十年代 中期以来，陕西省关中渭河流域的小麦植株上发生了一种叶片呈黄色花 叶、由土壤 中禾谷多粘菌 Po+ymy+agraminis传播的病毒病 [1。张秦风等研究了该病 的一些生物学特性，认为是小麦梭条斑花叶病 (WSSMV)”。据我们对该病毒的血清 学和外壳蛋 白亚基组分的研究认为称小麦黄花叶病 (WYMV)更为确切，本文报 道 有 关该病毒的提纯、粒子性质、血清学和 内含体超微结构的一些研究结果。 材 料 与 方 法 一 、 ■毒来鼍 1988—89年 3月在姨西省长安县小麦发病 田间，采集典 型症状的病株，称 重，贮于 --2YC下 以供病毒提纯使用。或直接 固定 ，作为 内台体超微结构观察材料。 小麦梭条斑花叶病 (WSSMV)病株于同期采 自江苏省里 下河地 区农科所小麦痛圃，以同样处 理备用 =、■毒分膏摄纯 根据 文献 ll，稍作修 改和简化。400g球冻小麦病叶，搜冉机搜碎，加入 1．200ml(O．Smo1]L) 磷酸钾缓冲浪pH7．0匀浆，双层纱布过滤}得仆涟约1．200ml，加300mlCOll尉烈摇动 Satin，静 置IOmln，上层液经s，000r／m离心20min，取上清，加入6嘶PEG(分子量6000)，3和 NtC1和i嘶 本文于1989年4月24日收到 ●浙江窖自然科学基始 资助项 日 张囊风 薯韩期帮助采集毒握，【拳匿，董珥佳参却部分赛验． 维普资讯 l94 ●事杂意 2。l嘲 Ytro|o|tls $iaxes Tritonx-100充分溶解，4℃过夜，经8，000r／m离心 20rain，取沉淀用 同样缓冲液悬浮， 10。000 r／=离心20mln，取上清 ，沉淀重复悬浮离心2敬，合并3次离心后所得的上清 ，总体积约120ml，然 后经 25，000r／m (HITACHIRP544转子 )离心2h(每管铺有 5m120~蔗糖垫，内含0．3和 Triton 一 100)，沉淀以同 样方法悬浮，重复 3次，得悬浮浪共 约 10ml，接着经 30，000r／= (H1TACHI RPSOT一3孛搴于)童心l，sb，沉端蠡淳成l皿l，进 善。一i5睁蔗糖奄度辫皋蕊心 22，000r／m (HITACHIRP$65一T转子 )离心3小时，取离心管上部1／s处的病毒屠，用同种缓冲液稀释后，经 40，O00,／m (H1TACHIRP80T-3转子)离心lh，最君将沉淀悬浮于 lml0．1otol／L磷酸钾缓冲液 pH 7． 0，获得病毒部分提纯制剂。