抗酒石酸酸性磷酸酶染色液.pdfVIP

北京雷根生物技术有限公司 抗酒石酸酸性磷酸酶染色液 染色液简介： 酸性磷酸酶(acid phosphatase ，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞 的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗 酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase ，TRAP)均在细胞滤泡中，并丌是 释放入血液。血液中的TRAP 绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP 了解破骨细胞的功能状态。 抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚 AS-BI 为底物，在酸性 pH 下被酸性磷酸酶水解释 放出磷酸和萘酚，萘酚不重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP 有 抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。 组成成分： 编号 DE0013 DE0013 Storage 名称 4 ×10ml 4 ×20ml 试剂(A): TRAP 固定液 50ml 100ml 4℃ 避光 试剂(B): B1: AS-BI Buffer 1ml 2ml -20℃ 避光 TRAP 孵育液 B2: GBC 染色液 0.1ml 0.2ml 4℃ 避光 B3: TRAP Buffer 9ml 18ml RT 避光 临用前，按B1:B2:B3=10:1:90 混合，即为TRAP 孵育液，即配即用。 试剂(C): Lea 苏木素染色液 10ml 20ml 4℃ 避光 试剂(D): 甲基绿染色液 10ml 20ml RT 避光 自备材料： 1、蒸馏水、恒温箱 2、载玻片、推玻片 3、光学显微镜 操作步骤(仅供参考) ： (一)血液、细胞涂片： 1、推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持30 度，置于血液或 细胞滴液的正前方，稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿 载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。 2、自然晾干，AS -BI 固定液4℃固定。 3、水洗，稍微晾干(丌易过分干燥)。 北京雷根生物技术有限公司 4、切片入TRAP 孵育液 ，置于37℃温箱，避光浸染，水洗。 5、复染：Leagene 苏木素染色液染色或甲基绿染色液染色。 6、水洗、晾干、镜检。 (二)冰冻切片： 1、冰冻切片回温至37℃，水中浸泡。 2、自然晾干，AS -BI 固定液4℃固定。 3、水洗，稍微晾干(丌易过分干燥)。 4、切片入TRAP 孵育液 ，置于37℃温箱，避光浸染，水洗。 5、复染：Leagene 苏木素染色液染色或甲基绿染色液染色3min。 6、水洗、晾干、镜检。 (三)石蜡切片： 1、石蜡切片脱蜡 5 ～10min ，重复一次。 2、无水乙醇 5min ，90%乙醇和70%乙醇各2min。 3、水洗2min。 4、自然晾干，AS -BI 固定液4℃固定。 5、水洗，稍微晾干(丌易过分干燥)。 6、切片入TRAP 孵育液 ，置于37℃温箱，浸染，水洗。 7、复染：Leagene 苏木素染色液染色或甲基绿染色液染色3min。 8、水洗、晾干、镜检。 染色结果： 阳性颗粒 紫红色 细胞核 蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿) 临床意义： 1、毛细胞白血病的毛细胞ACP 染色呈