正稿《基因工程》专题.ppt

1. 载体的必要条件 能自我复制，或能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达； 有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入。 具有某些标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 1、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库. ④过程 a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、复性（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 3.人工合成 ——根据已知的氨基酸序列合成DNA 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 已知核苷酸序列的较小基因可以化学合成，不需要模板。 质粒 目的基因 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 表达载体 同一种 1.过程 二、基因表达载体的构建——核心 限制酶切割位点的选择必须保证目的基因，标记基因的完整性，以便于检测和表达。 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？ 2、基因表达载体的作用 3.基因表达载体的组成： 它们有什么作用？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是mRNA结合位点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 基因表达载体 1、组成： 目的基因 + 启动子 终止子 标记基因 + + + 复制原点 2、目的基因、启动子、终止子不是质粒上固有的，标记基因、复制原点是质粒上固有的。 3、如果目的基因是从基因组文库中获取的，因为目的基因本身已含有启动子、终止子，在构建表达载体时，就不需要在加启动子、终止子。如果目的基因是从部分基因文库中获取的，因为目的基因本身不含有启动子、终止子，在构建表达载体时，就需要在加启动子、终止子。 4、单切酶法与双切酶法 单切酶法就是用同一种限制酶切割含目的基因的DNA片段和载体，形成相同的黏性末端，可用DNA连接酶连接重组DNA。由于单切酶切割后目的基因的前后各有一个互补的黏性末端，这两个互补的黏性末端会发生碱基互补配对使目的基因前后相连，形成自身连接，自我环化。同理质粒在DNA连接酶的作用下也会出现前后相连，形成自身连接。 双切酶法就是用两种不同的限制酶切割含目的基因的DNA片段和载体，使它产生两个不同的黏性末端，此时目的基因、载体就不会发生自我环化。而且在DNA连接酶的作用下，载体只能与目的基因的相应末端互补连接成重组质粒。 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 三、将目的基因导入受体细胞—转化 1、将目的基因导入植物细胞 ①农杆菌转化法 ②基因枪法 ③花粉管通道法 2、将目的基因导入动物细胞 显微注射技术：将基因表达载体提纯，用显微仪 注射到受精卵中 3、导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 ②方法： 受体细胞 受体细胞的种类：动物，植物细胞，微生物。 基因工程的目的不同，可选择的受体细胞不同。若生产基因工程药品，受体细胞一般选用微生物，利用微生物繁殖速度快的特点，可在短期内获得大量产品。若培养转基因动物，则选用受精卵。 受体细胞的选择： 四、目的基因的检测与鉴定 检测 ①导入检测：目的基因是否导入受体细胞 方法—— DNA分子杂交 ②表达检测 转录检测——分子杂交 翻译检测——抗原抗体杂交 分子检测法 鉴定 抗虫鉴定 抗病鉴定 活性鉴定等 个体水平的鉴定 1．下列有关基因工程技术的正确叙述是（ ） A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和载体 B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快 D．只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达 C 2.科学家运用基因工程技术将人胰岛素基因与大肠杆菌的质粒DNA分子重组，并且在大肠杆菌体内获得成功表达。图示a处为胰岛素基因与大肠杆菌质粒DNA结合的位置，它们彼此能结合的依据是 （ ） A．基因自由组合定律 B．半保留复制原则 C．基因分离定律 D．碱基互补配对