血凝抑制试验资料.docVIP

血凝抑制（HI）试验简介 （以禽流感病毒为例） 一、原理 流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试验由此得名。HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。 二、应用 该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。 三、缺点 只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。 四、试验步骤 1 阿氏（Alsevers）液配制 称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。（3.8%枸橼酸钠（3.8g枸橼酸钠，100ml超纯水），101 kPa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）） 以下是容易出现的错误： （1）对照孔凝集 盐类凝集：所谓盐类凝集即稀释液中氯化钠达至一定高浓度时，即使没有血清抗体也能发生凝集反应。 当生理盐水被细菌污染时也可出现对照孔凝集。 血清变质或受细菌污染。 （2）全部凝集 当红细胞受细菌污染或保存时间过长可出现此现象。 抗原滴加时出现失误，工作抗原效价过高。 生理盐水受细菌污染或其它因素。 （3） 红细胞全部下滑 ①当配制抗原时，配制工作抗原效价过低，不足以凝集鸡红细胞。 ②加样时所有孔全部加成生理盐水亦出现全部下滑现象。 （4）温度对实验结果也有影响，一般要求在室温下进行实验，当实验温度低于4℃时红细胞有时会发生自凝现象。 （5）抗原与抗体作用时间过长或过短对结果影响较大：过短出现凝集不完全；过长出现洗脱现象。 5