2蛋白质4.pptx

第五节 蛋白质的重要理化性质;(二)滲透压（Osmotic pressure）测分子量; 在理想的溶液中渗透压与溶质浓度的关系为； ?= —— C=溶质浓度 R=气体常数 （8.314) T=绝对温度 ? =渗透压 ;（三）蛋白质的扩散;1. 沉降速度法（Sedimentation velocity） 超离心法原理： 增加离心力强度(6万转以上），不同分子量的Pro颗粒就会以不同的速度沉降下来。用特殊的光学系统可观察到沉降界面，从而得pro沉降速度。 沉降系数（Sedimentation coeffecient) 10-13=Svedberg 用 S 表示，生物分子在1?10-13-200?10-13秒范围。 人的血红蛋白的沉降系数4.46S=4.46 ?10-13秒;;（ 1-?? ）为浮力因子，其中?为偏微比容=0.74cm3/g；?=容剂密度（g/cm3) D=扩散系数 R=气体常数（8.314J/k.mol) T=绝对温度（K） s=沉降系数 ;2.沉降平衡法 沉降平衡法测相对分子质量是在一个比较低速的离心力场中（8000－20000 r/min）进行的。离心开始时，分子颗粒发生沉降，由于沉降的结果造成浓度梯度。因而产生扩散作用。当净离心力和扩散力平衡时，在离心池里从液面到液底形成一个由低到高的恒定浓度梯度。 ;(五）凝胶过滤法 （gel filtration);;蛋白质分子通过凝胶柱的速度（洗脱体积的大小）并不直接取决于分子的质量，而是直接取决于它的斯托克半径。 ;(六） 电泳法测定分子量;电泳时颗粒受两种力作用： F电场力=qE＝q.(U/s) F摩擦力＝f v= 6prhv 当颗粒以恒定速度移动时： F电场力= F摩擦力 qE ＝f v 或 v/E=q/f 泳动度:μ= v/E;SDS（sodium dodecyl sulfate polyacylamide gel electrophoresis)测蛋白质分子量;SDS-蛋白质形成复合物，这带来两个后果： ① 蛋白质的原有电荷效应被覆盖，带有相同密度负电荷，电泳时都以同样的电荷/蛋白质质量比向正极移动。 ② SDS改变蛋白质分子单体构象，全部变成似雪茄烟形的长椭圆棒型。 这两个结果导致，蛋白质-SDS复合物的迁移率与分子量大小成正比。;SDS原理(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳);;;SDScont’d;电泳装置：水平平板电泳、垂直平板电泳、圆盘电泳;垂直板电泳槽;圆盘电泳槽;电泳图谱;;二、蛋白质的变性作用 1、概念∶ 天然的蛋白质在受到某些物理或化学因素的作用，有序的空间结构被破坏，致使生物活性丧失，并伴随发生一些理化性质的异常变化，但一级结构并未破坏，这种现象称为蛋白质的变性作用。 蛋白质变性的实质是蛋白质分子中的次级键遭到破坏，引起天然构象解体。变性不涉及共价键（肽键和二硫键）的破坏，一级结构仍保持完好。 ;2、蛋白质的变性因素及其作用机制 物理因素∶热、紫外线、超声波、X-射线、高压、表面张力、搅拌、剧烈振荡、研磨。 化学因素∶酸、碱、有机溶剂、重金属盐、尿素、胍、表面活性剂。 作用机制： 酸碱能破坏离子键； 有机溶剂可能降低蛋白质溶液的介电常数； 醇可能进入肽链之间的孔隙，破坏次级键； 尿素、盐酸胍能破坏氢键；;3、变性蛋白质的性质∶ 变性蛋白质与天然蛋白质性质的差别主要表现在∶ (1) 生物活性丧失。这是蛋白质变性的重要标志。 (2) 一些侧链基团暴露出来。 (3) 理化性质的变化。如溶解度下降、旋光性改变、粘度增加、光吸收性质增加、失去结晶能力、易发生凝聚和沉淀。 (4) 生化性质的变化。变性后的蛋白质易被酶水解。;4. 蛋白质的复性;三、蛋白质的酸碱性质 ? 由于蛋白质分子中氨基酸残基的侧链上的可解离功能集团以及两末端存在游离的氨基和游离的羧基，因此蛋白质与氨基酸一样具有两性解离的性质，因而也具有特定的等电点。 蛋白质的等电点与酸性氨基酸残基与碱性氨基酸残基的比例有一定的关系：酸性氨基酸残基多，pI低。;可解离基团：?-NH3+ ?-COO- 侧链上的功能基团 Glu的γ-COOH