山西汉族类风湿关节炎与HLA-DPB1基因相关性研究初探.docVIP

山西汉族类风湿关节炎与HLA-DPB1基因相关性研究初探 【摘要】 目的：探讨山西汉族类风湿关节炎（RA）与HLA-DPB1基因相关性。 方法 ：用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）方法检测36例RA患者和36例健康人的HLA-DPB1基因型。结果：RA患者HLA-DPB1*2201等位基因的频率显著高于正常对照组。结论：HLA-DPB1*2201可能是山西汉族类风湿关节炎的易感基因。 【关键词】 类风湿关节炎；HLA-DPB1；PCR-SSP Abstract Objictive：To investigate the association between HLA-DPB1 and rheumatoid arthritis(RA) of the Han nationality in Shanxi. Methods：polymerase chain reaction-sequence specific primers (PCR-SSP) was used to study the HLA-DPB1gene in 36 patients with RA and 36 healthy controls of the Han nationality in Shanxi. Results： The allele frequencies of HLA-DPB1*2201 was significantly higher in RA patients than those in healthy controls. Conclusion：Our date suggested that the HLA-DPB1*2201 may be related to rheumatoid arthritis. key words Rheumatoid arthritis;HLA-DPB1;PCR-SSP 类风湿关节炎（RA）是一种严重 影响 人类健康的慢性自身免疫性疾病，国内外许多 研究 提示HLA-DPB1与RA的发病密切相关［1～6］。HLA-DPB1基因具有高度多态性，其分布可因人种、民族、地理环境等因素的不同而有很大差异，故不同地区、种族人群中与RA相关的HLA-DPB1基因型也存在较大差异。我们 应用 聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）方法，对RA患者和健康对照组的HLA-DPB1基因进行分型研究，以期为探讨RA的发病机制及遗传易感性提供 参考 。 1 材料与方法 1.1 研究对象 2004年6月～2006年12月在长治医学院附属和济 医院 就诊的山西籍RA患者36例，均符合美国风湿病学会1987年制定的诊断标准；对照组36例为与患者同地区、无血缘关系的健康人。 1.2 主要试剂 HLA-DPB1分型PCR-SSP试剂盒为戴诺公司产品。 1.3 基因组DNA制备 无菌采集静脉血，分离外周血单个核细胞，采用改良的盐析法提取基因组DNA。提取的DNA用紫外分光光度仪测定浓度和纯度，OD260/280在1.7～1.9。 1.4 PCR扩增 将提取的基因组DNA作为模板与引物混合，加入dNTP及TaqDNA聚合酶，经PCR技术扩增基因片段。扩增条件为：第一步，96 60 s；第二步，96 25 s、70 50 s、72 45 s共5个循环；第三步，90 25 s、65 50 s、72 45 s共21个循环；第四步，96 25 s、55 60 s、72 120 s共4个循环；4 保温。PCR反应约1.5 h完成。 1.5 基因型的确定 取PCR扩增产物，2%琼脂糖凝胶（含0.5 μg/mL溴乙锭）电泳后，在紫外透射灯下观察结果，根据PCR产物的有无及大小确定基因型别。 1.6 统计学处理 所得结果用SPSS 10.0软件 分析 。RA患者和健康对照组各等位基因频率比较用四格表χ２双侧检验，显著性差异以P＜0.05为准。 2 结果 2.1. HLA-DPB1分型结果 RA患者及健康对照组HLA-DPB1等位基因分布见表1。 张雄鹰等.山西汉族类风湿关节炎与HLA-DPB1基因相关性研究初探表1 RA患者和健康对照的HLA-DPB1基因频率比较* 与健康对照比较P＜0.05 健康人中检出14种HLA-DPB1等位基因，其中HLA-DPB1*0201（22.2%）、HLA-DPB1*0501（22.2%）、 HLA-DPB1*0402（15.3%）、 HLA-DPB1*0301（9.7%）、 HLA-DPB1*2201（8.3%）基因频率较高。RA患者中检出9种HLA-DPB1等位基因，其中HLA-DPB1*2201（26.4%）、HLA-DPB1