川芎嗪对脑挫伤皮质半暗带Bcl-2表达的影响.docVIP

川芎嗪对脑挫伤皮质半暗带Bcl-2表达的影响 作者：李海峰，张辉，李卫东，薄爱华 【摘要】 　　目的探讨川芎嗪对脑挫伤半暗带皮质神经元抗凋亡基因Bcl-2表达的影响。方法采用Fenne’ s自由落体法，复制大鼠脑挫伤动物模型，采用川芎嗪进行 治疗 ，第24小时和72小时取脑切片进行SP免疫组织化学染色。采用图象分析技术统计半暗带区Bcl-2阳性神经元数密度和灰度。结果治疗小剂量和大剂量组（1，2组）Bcl-2阳性细胞数目和深度高于假手术组和模型组（P0.05），72 h组明显高于24 h治疗组（P0.05）。结论川芎嗪对脑挫伤半暗带Bcl-2有明显的上调作用，从而减轻半暗带神经元损伤。 【关键词】 川芎嗪 脑挫伤 半暗带 免疫组织化学 　　Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of ligustrazize on expression of Bcl-2 gene in cerebral injury penumbra.MethodsThe rats were reconstructed model of brain injury by Fenne’ s method,and treated wich ligustrazize. After 24 h and 72 h section,the brain were stained by immunohistochemistry method. The numerical density and average gray value of Bcl-2 positive cell were observed by image analysis in cerebral penumbra. ResultsIn ligustrazize treated group( little dosage and large dosage). Positive cells of Bcl-2 were increased and the average gray value was elevated as compared with sham operated group and model group (P0.05) . 72 h group was significantly higher than 24 h group（P0.05）. ConclusionThe ligustrazize can promote expression of Bcl-2 gene and decrease neuron damage in penumbra area. 　　Key words：Ligustrazize； Brain injury； Penumbra； Immunohistochemistry 　　头颅受到重物捶击，导致局部脑组织挫裂伤，伤灶中心区发生出血和组织碎裂，伤灶周围区神经组织虽有短时间缺血缺氧损伤，但神经元尚可恢复，此区被称为“半暗带”(penumbra)。目前对于半暗带的形成机制有不少报道［1，2］，但是中药对半暗带基因表达的影响报道甚少。本实验利用Fenne’s的方法复制大鼠脑挫伤模型，利用免疫组织化学技术观察川芎嗪对凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响，为阐明川芎嗪治疗脑挫伤的机制提供 科学 依据。 　　 1 材料与方法 　　1.1 动物及脑挫伤模型复制利用成年Wistar大鼠40只,雌雄兼用。假手术组10只，模型对照组10只，治疗1，2组（小、大剂量）各10只。利用Feene’s自由落体法，复制端脑顶叶脑挫伤动物模型。伤后立即腹腔注射川芎嗪液（500 mg/kg或 100 mg/kg），1次/d，共3 d。 　　1.2 取材及切片脑挫伤后24 h和72 h戊巴比妥钠麻醉大鼠，迅速取脑，平漏斗前后缘冠状切开，取脑片（约1 mm厚度）假手术对照及模型组与治疗组同时杀死取材。将脑片在10%甲醛中固定24 h，常规石蜡包埋和切片，切片厚度6 μm。 　　1.3 免疫组织化学染色 Bcl-2抗血清及SP试剂盒及DAB显色剂，均购自北京中杉金桥生物公司，免疫组织化学染色程序严格按照试剂盒说明书操作。 　　1.4 结果分析 Bcl-2阳性细胞质呈棕黄色，核不着色。利用彩色图象分析仪和北航提供的分析软件检测Bcl-2阳性细胞的数密度(细胞个数/mm3)及灰度(为相对数,数值大色浅,数值小色深)以此表示Bcl-2阳性物质的含量及阳性细胞的多少。 　　1.5 统计学分析 组间比较采用t检验，P0.05为差异有显著性。 　　 2 结果 　　假手术组Bcl-2阳性细胞色浅而且阳性数目很少；模型组中Bcl-2阳性细胞在皮质半暗带中有所增