恶性肿瘤患者循环血DNA的研究进展_0.docVIP

恶性肿瘤患者循环血DNA的研究进展 【关键词】 循环DNA 肿瘤 肿瘤标志物 综述 循环DNA是一种无细胞状态的胞外DNA，存在于血液（血清或血浆）、滑膜液和脑脊液等体液中，其主要是由单链或双链DNA以及单链与双链DNA的混合物组成，以DNA蛋白质复合物或游离DNA两种形式存在。早在1947年Mandel和Metais就发现了循环核酸；30年后Leon等人的 研究 表明肿瘤患者外周血清DNA水平大大高于正常人；1989年Stroun等发现血液游离DNA具有肿瘤细胞DNA的一些特征；5年后研究者在肿瘤患者的血浆和血清中检测到了癌基因突变，并且与原发肿瘤相一致。随着肿瘤分子生物学研究的进展，循环血游离DNA的检测及其生物学指标的研究，将有可能为临床肿瘤的早期诊断、预后判断及跟踪随访等提供一系列方便、快捷、特异、无创或微创和分子生物学检测手段。 1 恶性肿瘤循环血DNA的来源 正常人循环血中存在少量游离DNA，主要来源于细胞核DNA和线粒体DNA，常小于10 ng·ml-1；肿瘤患者循环血DNA主要来源于肿瘤细胞，其血浆DNA浓度平均可达180 ng·ml-1。Shapiro等[1]检测了386例消化道疾病患者血清DNA水平，发现肿瘤患者、良性疾病患者、正常人的血浆DNA水平平均分别为（412±63）、（118±14）和(14±3） μg·L-1，3组间差异有明显统计学意义。屠红等[2]检测了483例恶性肿瘤及150例健康人血清DNA水平，分别为（81.3±98.3）和（22.2±13.4） ng·ml-1，两者间差异有显著性。 目前 ，关于恶性肿瘤患者循环血DNA的来源及其发生机制有以下几种假说：（1）肿瘤细胞不断释放DNA进入血液循环。淋巴细胞或离体培养的器官能通过一种自我平衡的机制自发释放核蛋白复合物，并优先释放细胞内新合成的DNA。因此，有人推测肿瘤循环DNA可能以同样的方式释放入血。越来越多的研究[3]表明，肿瘤在生长过程中能持续自发释放肿瘤细胞DNA进入外周血液，成为循环血DNA的主要来源。（2）循环中肿瘤细胞或微转移灶的裂解。最常见的假说认为肿瘤患者血浆中的DNA主要来源于循环肿瘤细胞或者微转移灶细胞的裂解，但外周血中显然没有足够的肿瘤细胞能产生如此高水平的血浆DNA。研究发现，血浆DNA与一种18个赖氨酸的多肽结合成复合体，从而保持DNA在血浆中结构和功能的稳定性，并且可能是DNA非病毒传递系统中的一种主要传递方式。（3）肿瘤细胞的坏死或凋亡。因为在具有较多坏死组织的大肿瘤或进展期伴转移的晚期患者的血浆中发现较高水平的血浆DNA，从而推测血浆DNA可能来自肿瘤细胞的坏死。但是，在肿瘤早期也能在血浆中检测到DNA水平的升高[4]，说明肿瘤细胞的坏死可能不是循环血DNA的主要来源。由于血浆DNA电泳后可表现出凋亡细胞所特有的典型“梯型”条带[5]，因此，也有研究认为凋亡也是循环DNA的来源。另外肿瘤细胞侵袭周围细胞引起组织变性而释放DNA入血；淋巴细胞在与肿瘤细胞相互作用时亦能够释放一定量的DNA。由此可见，肿瘤患者循环DNA的形成是多种途径共同作用的结果，其来源与生理和病理状态下细胞代谢过程密不可分。 2 肿瘤相关的不同类型血清DNA改变 2.1 抑癌基因启动子的异常甲基化 DNA的甲基化是指生物体DNA在DNA甲基转移酶的催化下，以S腺苷甲硫氨酸为甲基供体，将甲基转移到特定碱基上去的过程。其改变通过基因机制和表遗传学机制引起与细胞增殖和分化有关的基因表达异常，造成细胞失去对正常分化过程的控制而发生癌变，最后形成肿瘤。异常甲基化包括癌基因的低甲基化、抑癌基因的高甲基化、基因组不稳定性和基因印迹等几个方面，其中抑癌基因启动子的高甲基化是抑癌基因失活的一个重要机制，在肿瘤发生 发展 中起重要作用。 甲基化特异性PCR(MSP)法是1996年发展起来的一种检测血浆DNA高甲基化 方法 ，其原理是用硫酸盐将未甲基化的胞嘧啶残基转化为尿嘧啶，通过设计CpG岛的甲基化和非甲基化的特异引物各一对，进行特异性扩增即可将二者区分开来。LIU等[6]用MSP法检测不同癌症患者血清中p16基因甲基化，其中大肠癌患者血清中p16甲基化检出率早期为44%，晚期为54%。而肺癌、食管癌、乳腺癌和卵巢癌检出率分别为48%、50%、100%和40%。Zou等[7]在38％的大肠癌组织中检出了p16基因甲基化，血清中与之符合率达70％，而结肠腺瘤样息肉患者、健康者血清中都未检出p16甲基化，说明大肠癌患者组织和血清中p16甲基化改变的一致性。在肺癌方面，腺癌样结肠息肉病（APC）基因的高甲基化，被认为是生存较短的独立预后指标[8]；APC基因高甲基化也作为食管腺癌发生的危险因素，比年龄或疾病临床分期更能预示患者的生存期