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改良一步法微量淋巴细胞毒交叉试验 　　淋巴细胞毒交叉试验也称补体依赖细胞毒试验（CDC）。它是检查器官移植受者体内有无针对供者，或者供者针对受者的HLA抗体，在器官移植前一定要进行CDC检测。如果受者血清中检出针对供者的HLA抗体，一般认为是配合禁忌，移植后受者会发生超急性排异反应，导致移植失败。由于试验是在施行器官移植术前临时进行匹配的试验，要求在短时间内报告结果，因此我们对该技术作了改良并与传统 方法 进行比较，收到满意效果。现报告如下： 　　一、材料和方法 　　1.被检对象： 标本来源于我院近10个月住院和门诊280例拟做肾移植待诊病人和其他器官移植待诊病人，采静脉血2 ml不抗凝待测。 　　2.试剂： 免疫磁珠、荧光染液由美国O L公司提供，抗全淋巴细胞抗体试剂购自武汉生物制品 研究 所。 　　3.方法：(1)改良一步法：采用免疫磁珠3～5 μl分离出淋巴细胞，在Terasaki板上每孔加入无菌矿物油5 μl，每排第1孔加生理盐水1 μl做阴性对照，第2孔加抗全淋巴细胞抗体1 μl做阳性对照，第3～6孔各加受者血清1 μl(即重复4孔试验)，每孔各加供者淋巴细胞1 μl(细胞浓度为2 000个/μl)，每孔各加补体1 μl，置22～25室温下反应45 min左右，每孔加荧光染液5 μl，倒置荧光显微镜下观察细胞毒性反应， 分析 判断结果。(2)传统常规法见 参考 文献 ［1］。 　　二、结果 　　采用改良一步法进行了400次淋巴细胞毒交叉试验，有9次检出阳性(阳性率为2.25%)。其中1例患者反复多次CDC阳性，后进行HLA抗体检测， 特定细胞群反应抗体 (Panel Reactive Antibody， PRA) 阳性率为53.5%， 提示抗HLA-A2抗体增多，故放弃移植。 　　一步法与传统法试验比较：样本用量一步法1 μl，传统法40 μl；试验全过程一步法1.5 h内完成，传统法需2.5～4 h；补体用量一步法1 μl，传统法40 μl；30例标本用双盲法同时试验，结果一致。 　　三、讨论 　　改良一步法CDC缩短和简化了试验时间、操作步骤，整个试验过程在1.5 h内完成。大量标本还可同时输入 计算 机分析。免疫磁珠分离淋巴细胞纯度高且时间短，用荧光染色的结果容易观察，倒置荧光显微镜下死细胞呈红色，活细胞呈绿色，对比分明，易于识别。而传统常规法的伊红染色，在镜下观察判断细胞死活结果有很大的难度，经30例样本用2种方法进行双盲试验，其结果一致，可以证明改良法在样本用量上、淋巴细胞分离、交叉反应时间及判断结果上均表现出优于传统法的特点。同时改良法可节省抗全淋巴细胞抗体、补体等试剂用量，降低试验成本。 　　参考文献 　　1，赵桐茂. HLA原理及其 应用 . 上海 科学 技术出版社，1984. 278-279. 1