栀子对兔膝骨关节炎模型关节软骨病理改变及白细胞介素-1β表达的影响.docVIP

栀子对兔膝骨关节炎模型关节软骨病理改变及白细胞介素-1β表达的影响 作者：吴剑　鲍同柱　舒迅　赵龙桃　鄢飞　严雪港 【摘要】 目的观察栀子浸膏对Hulth法复制兔膝骨关节炎模型中软骨的病理改变及关节液中白细胞介素-1β（IL-1β）的影响。方法24只大白兔随机分为给药组，模型组和对照组，每组8只。给药组，模型组行Hulth术法复制骨关节炎模型，术后第5周，给药组以栀子浸膏600 mg/kg灌胃，模型组与对照组给予等量生理盐水灌胃，给药3周后行软骨Pelletier JP与Mankin’s评分，取股骨内侧髁约0.5 cm×0.5 cm×0.2 cm组织块行电镜观察软骨细胞形态及检测关节液中IL-1β的含量。结果栀子浸膏能减轻关节软骨病理损伤，给药组关节液中IL-1β的含量明显低于模型对照组(P0.05)。结论栀子浸膏可减少骨关节炎模型关节液IL-1β的含量和保护关节软骨的作用。 【关键词】 骨性关节炎; 栀子；关节软骨 　　骨关节炎（Osteoarthritis, OA）的发病机制尚未完全阐明，但有关软骨降解的机制已得到深入研究，目前认为白细胞介素-1β（IL-1β）参与了这一过程，它促使软骨细胞、基质的降解以及滑膜炎的形成［1］。栀子系茜草科植物的成熟果实，有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒功效。用于热病心烦,黄疸尿赤,血淋涩痛,血热吐衄,目赤肿痛,火毒疮疡; 外治扭挫伤痛等［1,2］。通过研究栀子浸膏对实验性骨关节炎的影响，本实验观察了栀子浸膏对兔膝OA模型关节液IL-1β及软骨细胞形态的影响。 　　 1 材料与仪器 　　1.1 动物 　　大耳白兔24只，3～4月龄，体重2.0～2.5 kg, 雌雄各半，由武汉市万千佳禾实验动物养殖有限公司提供。 　　1.2 药物生栀子浸膏的制备：取成熟生栀子果仁3 000 g（宜昌众生药业公司中药饮片厂生产）,用75%乙醇提取后浓缩得粘稠浸膏436 g(6.88 g生药/g浸膏)；青霉素，华北制药股份有限公司；氯胺酮，福建古田药业有限公司。 　　1.3 试剂IL-1β试剂盒为TBD生物 发展 中心产品。 　　1.4 仪器OLYMPUS 光学显微镜，日本奥林巴斯公司生产；RM2315切片机，德国LEica 公司生产； 电子 显微镜，日本日立公司生产。 　　 2 方法 　　2.1 模型的制备、分组及给药 　　将24只白兔随机分为给药组、模型组和对照组，每组8只。氯胺酮（10 mg/kg）麻醉后，给药组、模型组行单侧Hulth术，即取膝关节内侧长约4 cm 的纵切口,探查关节腔内无原发病变后切断内侧副韧带、前后交叉韧带;并完整切除内侧半月板,注意勿损伤关节软骨面,彻底止血,冲洗关节腔,行抽屉实验阳性后,逐层缝合关节囊,皮肤,无菌敷料包扎伤处,不予固定；对照组仅打开关节腔,不损伤韧带和半月板,缝合皮肤,无菌敷料包扎伤处。术后每天肌肉注射青霉素40万U,伤口换药,连续7 d 预防感染。根据临床上超疲劳活动容易提前出现骨关节炎的发病特点［3］,手术1周 后,每天强迫动物活动30 min ,分2 次驱赶,4周后即可获得稳定的OA 模型。术后第5周开始栀子浸膏组给予栀子浸膏600 mg/kg灌胃，模型组和对照组分别给予等量生理盐水灌胃，给药3周。 　　2.2 样本取材及实验指标的检测 　　在患侧关节处脱毛，消毒后用装有1 ml生理盐水注射器行关节腔穿刺，将1 ml生理盐水注入关节腔，反复冲洗后抽出，盛于2 ml离心管中，3 000 r/min, 离心10 min，取上清，按试剂盒方法检测IL-1β含量。沿原切口切至关节腔行大体(肉眼) 观察后,以锐利刀片切取股骨内髁软骨,置于10 %甲醛中固定,系列脱水、脱钙,常规石蜡包埋,切片,HE 染色,以备光镜观察(大体Pelletier JP评分及光镜下Markin’s 评分［4］)。取股骨内髁关节软骨修成1 mm ×1 mm ×1 mm 的全软骨层,分别以3%戊二醛固定8 h后置于缓冲液中,再以锇酸固定、脱水,环氧树脂包埋,纵向超薄切片经电子染色后备电镜观察。 　　2.3 统计学分析 　　数据均以 ±s表示，大体评分用秩和检验,其余组间比较用t检验。 　　 3 结果 　　3.1 大体观察 　　按以下原则评分:关节面光整,色泽如常，为0 分;关节面粗糙,有小的裂隙且色泽灰暗，为1分;关节面糜烂,软骨缺损深达软骨表中层，为2分;关节面溃疡形成,缺损深达软骨深层，为3分;软骨剥脱,软骨下骨质暴露，为4分［4］。给药组软骨改变以糜烂粗糙为主,部位集中在股骨内髁内侧,其中2 例出现了内髁内侧缘纤维软骨增生。模型组软骨改变仍集中在股骨内髁关节面,以溃疡形成为主,且内髁内侧缘纤维软骨增生更加明显,其中2 例出现软骨剥脱。对照组软骨表面没有明显改变。表1示