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浅谈甲氨蝶呤对大鼠输卵管雌孕激素受体的影响 论文联盟www.LWLM.com编辑。 摘要： 目的 观察不同剂量甲氨蝶呤（MTX）对假孕SD大鼠输卵管雌孕激素受体的损伤，探讨MTX治疗后对后续妊娠的潜在影响，为临床使用甲氨蝶呤保守治疗异位妊娠提供理性的合理选择。方法 40只SD雌性大鼠，致假孕状态后再MTX腹腔注射，随机分为1mg/kg组、2mg/kg组、5mg/kg组及对照组(腹腔注射生理盐水)，10d后处死各组大鼠，取双侧输卵管壶腹部组织，进行雌、孕激素受体的免疫组化染色。结果 ER阳性表达率在不同剂量组的差异具均有统计学意义(P0.05)，表现为随着MTX剂量的增加，ER阳性表达下降。PR在MTX处理各组输卵管黏膜上皮中的表达与对照组差异无统计学意义（P0.05）。结论 MTX可损伤输卵管雌激素受体，且损伤效应存在一定的量-效关系，提示临床中使用MTX保守治疗异位妊娠时，应减少剂量，否则可能会造成后续的再次异位妊娠或继发不孕。 关键词： 甲氨蝶呤 输卵管 雌激素受体 孕激素受体 　　 近年对输卵管妊娠的早期诊断率显著提高，使得药物保守治疗得以应用。目前，甲氨蝶呤（methotrexate, MTX）是输卵管妊娠的药物保守治疗中常用和首选的药物，该药可抑制滋养细胞增生，破坏绒毛，促使胚胎组织坏死、脱落，从而达到保守治疗输卵管妊娠的目的［1］。雌、孕激素受体广泛存在于女性生殖道组织中，两者的的协调表达状态与胚泡着床机制密切相关。本文首次系统研究不同剂量MTX对雌性假孕SD大鼠输卵管黏膜雌、孕激素受体的损伤效应及可能的量-效关系，探讨MTX治疗后输卵管损伤对后续妊娠的潜在影响，为临床使用MTX保守治疗异位妊娠提供理性的合理选择。 1 材料与方法 1.1 实验动物及试剂 雌性未孕SD(sprague dawley)大鼠40只，6～8周龄，体重180～200g，由温州医学院实验动物中心提供；甲氨蝶呤购自江苏恒瑞医药股份有限公司；妊马血清促性腺激素(Pregnant mare serum gonadotropin，PMSG)购自杭州动物药品厂；人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin，HCG)购自丽珠集团制药厂；雌激素受体(estrogen receptors，ER)、孕激素受体(progesterone receptors，PR)单抗免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程公司。 1.2 方法 （1）假孕大鼠模型的制备及MTX处理：40只雌性SD大鼠，清洁实验动物条件下饲养，置于室温25，正常的昼夜光照，实验前参照文献中使用的方法制作假孕模型［2］，所有大鼠皮下注射PMSG 50U，48h后再次皮下注射HCG 100U。致假孕状态后再行MTX腹腔注射，依剂量不同，假孕大鼠被随机分为1mg/kg（组，10只大鼠）、2mg/kg（组，10只大鼠）、5mg/kg（组，10只大鼠），另设置腹腔注射生理盐水0.5ml为对照组（组，10只大鼠）。MTX处理后10d，处死各组大鼠，因输卵管妊娠多发生在壶腹部，因此本研究取邻近卵巢部位的双侧输卵管壶腹部组织。所有标本用10%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，制成5m厚的石蜡切片，进行雌、孕激素受体的免疫组化染色，观察不同组中MTX对输卵管雌孕激素受体的损伤效应与量-效关系。本研究中所有的动物实验均按照我国有关动物实验的立法进行。（2）免疫组织化学染色及判断标准：采用免疫组化SP二步法，参照文献中的方法判定染色结果［3］。每张免疫组化切片在200倍光镜下观察5个视野，阳性细胞表达占30%为(+)，占50%以上为(+++)，两者之间为(++)，未见阳性表达或只有极少数阳性细胞染色为阴性表达(-)。以PBS代替一抗作为阴性对照。 1.3 统计学处理 ER、PR的阳性表达率为计数资料，采用SPSS 10.0软件包建立数据库，进行统计分析；不同剂量MTX处理后的阳性表达率比较采用Kruskal-wallis检验。以P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 ER和PR阳性表达主要位于输卵管黏膜组织的上皮细胞核中，为棕黄色颗粒染色，空白对照中未见棕黄色染色，另外在输卵管壁肌纤维核中亦有少量ER和PR的阳性表达。结果显示，不同剂量MTX处理均下调了大鼠输卵管黏膜上皮组织中ER表达，经Kruskal-wallis检验，差异具有统计学意义(P0.05)，详见表1和图1；不同剂量MTX处理对大鼠输卵管黏膜上皮组织中PR的表达不甚明显，经Kruskal-wallis检验，差异无统计学意义（P0.05），详见表1和图2。表1 不同剂量MTX作用后假孕大鼠输卵管中ER、PR表达情况 　　3 讨论 3.1 MTX在输卵管妊娠保守治疗中的应用 近年来，随着盆腔