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喜甍岛镐娥添加隶嘎2∞8年第／3卷第6期 用于检测孔雀石绿的全抗原的合成与鉴定 龚朋飞， 周美华， 郑志青 (广东温氏食品集团研究院，广东云浮527400) 摘要 外扫描光谱和蛋白电泳鉴定得到伞抗原。用制备的抗原乳化后免疫小鼠获得了效价较高的多克隆抗体。为进一步制 备抗孑L雀石绿单克隆抗体打下基础． 关键词 孔雀白．绿全抗原鉴定 文献标识码：A 文章编号：1007—9157(2008)06—0001—04 中图分类号：$859．84；Q503 孔雀石绿(Malachite 将其作为抗原可产生相似的抗原表位检测LMG，故 green，MG)又称孔雀绿、碱 性绿、维多利业绿或巾圉绿．常用于水体消毒和防 可用PA替代LMG合成全抗原来检测MG。本试验 通过合成PA的人．r．完全抗原．制备其多抗，为制备 治鱼病害。MG及其代谢产物无色孔雀石绿(LMG)。 副品红(PAl、结晶紫等都属于三苯甲烷结构化合物抗MG单克隆抗体及检测其残留的El。ISA检测试 (见图1)。三苯甲烷结构非常稳定．很难被机体降 剂打下基础。 解，长期残留具有致癌性。欧盟、美国已宣布禁止其 l材料与方法 在经济鱼类养殖中使用。 1．1试剂与试验动物 灵敏、快速检测水产动物中的MG残留已成为 当务之急。研究表明…，MG进入鱼体内即迅速转为 LMG．14h后80％的MG转为LMG，并在体内蓄250。副品红(PA，上海试剂三厂)。其他试剂均为国 积。目前检测MG主要运用色谱技术…．灵敏度较 产分析纯。清洁级BALB／C小鼠和昆明小鼠，由巾国 高、准确性好，但样品前处理繁琐。检测时间长．耗 科学院上海实验动物中心提供。 资大．不适合大量样品筛选。酶免疫测定法具有快 1．2 PA免疫原和检测抗原的合成(重氮化法) 速、灵敏、高效等优点，用El。ISA原理制成试剂盒。 称取30 PA溶于5mL0．1mol／1．HCI。不断 mg 可更方便地对大批样品进行筛选。检测MG残留可 搅拌使溶液颜色变为淡红色．在冰浴巾预冷至4℃ 直接检测LMG，而PA与LMG相差仅1个甲基，3]。以下，缓慢加入l％NaNO：。边加边搅拌至重氮化完 全。4℃以下继续反应20min。称取 BSA200 mg溶于10mL蒸馏水，将 ／ H3C＼，CIts 其预冷至4℃以下后．边搅拌边缓 N+Cl。 慢加到重氮化溶液中。同时用0．0l mol／L NaOH调pH值至7．5～8．0，置 4℃冰箱反应过夜。将偶联混合液装 ／N+＼CI—HsC． 入透析袋中．于4℃下用0．1mol／L H3C CH3 ＼ ／CH3 H2N NH2 N 7．2)透析3d，每天换透析