苏州大学848生物化学部分真题答案汇总课案.docx

概述 SDS法测蛋白质相对分子质量的原理。 ? 答案： ? (1）聚丙烯酰胺凝胶是一种凝胶介质，蛋白质在其中的电泳速度决定于蛋白质分子的大小、形状和所带电荷数量。 (2）十二烷基硫酸钠(SDS）可与蛋白质大量结合，结合带来两个后果：①由于SDS是阴离子，故使不同的亚基或单体蛋白质都带上大量的负电荷，掩盖了它们自身所带电荷的差异; ②使它们的形状都变成杆状。这样，它们的电泳速度只决定于其相对分子质量的大小。 (3）蛋白质分子在SDS凝胶中的移动距离与指示剂移动距离的比值称相对迁移率，相对迁移率与蛋白质相对分子质量的对数呈线性关系。因此，将含有几种已知相对分子质量的标准蛋白质混合溶液以及待测蛋白溶液分别点在不同的点样孔中，进行SDS;然后以标准蛋白质相对分子质量的对数为纵坐标，以相对应的相对迁移率为横坐标，绘制标准曲线;再根据待测蛋白的相对迁移率，即可计算出待测蛋白的相对分子质量。 ?试述丙酮酸氧化脱羧反应受哪些因素调控?? 答案：(1）变构调控：丙酮酸氧化脱羧作用的两个产物乙酰 CoA和NADH都抑制丙酮酸脱氢酶复合体，乙酰CoA抑制二氢硫辛酰胺乙酰转移酶(E2），NADH抑制二氢硫辛酰胺脱氢酶 (E3）组分。? (2）化学修饰调控：丙酮酸脱氢酶磷酸化后，酶活性受到抑制，去磷酸化后活性恢复。 ?(3）丙酮酸脱氢酶(E1）组分受GTP抑制，为AMP所活化。 ?? 简述保证DNA复制忠实性的因素及其功能？? (1）半保留复制的原则， ?(2）碱基互补配对的规律，A-T??G-C?。 ?(3)DNA聚合酶I的校对作用， ?(4)引物的切除， 简述真核生物与原核生物转录的不同点。 ?答案：? 真核生物的转录在很多方面与原核生物不同，具有某些特殊规律，主要包括： ?(1）转录单位一般为单基因 (单顺反子），而原核生物的转录单位多为多基因(多顺反子） ;? (2）真核生物的三种成熟的RNA分别由三种不同的RNA聚合酶催化合成;? (3）在转录的起始阶段，RNA聚合酶必须在特定的转录因子的参与下才能起始转录;? (4）组织或时间特异表达的基因转录常与增强子有关，增强子是位于转录起始点上游的远程调控元件，具有增强转录效率的作用;? (5)转录调???方式以正调节为主，调节蛋白的种类是转录因子或调节转录因子活性的蛋白因子。 某一肽链中有一段含15圈α-螺旋的结构，问： ?(1）这段肽链的长度为多少毫微米？含有多少个氨基酸残基？? (2）?翻译的模板链是何种生物分子？它对应这段α?-螺旋片段至少由多少个基本结构单位组成？?? (3）在合成这段肽链过程中，若以氨基酸为原料， 活化阶段至少消耗多少ATP？延长阶段至少消耗多少 GTP？ ?答案： (1)肽链长度：15＊0.54=8.1nm????????氨基酸残基数：15＊ 3.6=54(?个)? (2）模板是mRNA分子，对应这段α?-螺旋片段的mRNA 至少含有162个核苷酸(54＊3=162）。 ?(3)活化阶段消耗ATP数：54＊2=108???延长阶段消耗GTP 数：54＊2=108 常用于蛋白质多肽链N端.C端测定的方法有几种?基本原理是什么? (1)N-末端测定 　　A.二硝基氟苯法(FDNB,DNFB)：1945年Sanger提出此方法,是他的重要贡献之一. 　　DNP-氨基酸用有机溶剂抽提后,通过层析位置可鉴定它是何种氨基酸.Sanger用此方法测定了胰岛素的N末端分别为甘氨酸及苯丙氨酸. 　　B.氰酸盐法：1963年Stank及Smyth介绍了一种测定N末端的新方法,步骤如下： 　　由于乙内酰脲氨基酸不带电荷,因此可用离子交换层析法将它与游离氨基酸分开,分离所得的乙内酰脲氨基酸再被盐酸水解,重新生成游离的氨基酸,鉴别此氨基酸即可了解N-末端是何种氨基酸. 　　C.二甲基氨基萘磺酰氯法：1956年Hartley等报告了一种测定N-末端的灵敏方法,采用1-二甲基氨基萘-5-磺酰氯,简称丹磺酰氯.它与游离氨基末端作用,方法类似于Sanger的DNFB法,产物是磺酰胺衍生物. 　　丹磺酰链酸具有强烈的黄色荧光.此法优点为灵敏性较高(比FDNB法提高100倍,样品量小于1毫微克分子)及丹磺酰氨基酸稳定性较高(对酸水解稳定性较DNP氨基酸高),可用纸电泳或聚酰胺薄膜层析鉴定. 　　(2)C-末端分析 　　A.肼解法：这是测定C-末端最常用的方法.将多肽溶于无水肼中,100℃下进行反应,结果羧基末端氨基酸以游离氨基酸状释放,而其余肽链部分与肼生成氨基酸肼. 　　这样羧基末端氨基酸可以采用抽提或离子交换层析的方法将其分出而进行分析.如果羧基末端氨基酸侧链是带有酰胺如天冬酰胺和谷氨酰胺,则肼解时不能产生游离的羧基末端氨基酸.此外肼解时注意避免任何少量的水解,以免释出的氨基酸混淆末端分析. B.